【目的】構(gòu)建和表達(dá)登革病毒4型病毒樣顆粒,初步研究其免疫學(xué)特性�！痉椒ā坑肦T-PCR法擴(kuò)增DENV4-prM/E基因,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGAPZ-sprM/E-D4,轉(zhuǎn)化X33酵母菌株,SDS-PAGE、Western Blot鑒定目的蛋白表達(dá)。切片電鏡檢測病毒樣顆粒,蔗糖密度梯度離心純化。免疫三組Balb/C小鼠,每組15只。采用間接ELISA檢測抗原特異性抗體,間接免疫熒光法檢測免疫血清與天然病毒粒子的結(jié)合,流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠脾淋巴細(xì)胞表型,酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（ELISPOT）檢測脾分泌IFN-γ、TNF-α和IL-10的細(xì)胞�！窘Y(jié)果】重組質(zhì)粒在酵母中以病毒樣顆粒形式表達(dá),為直徑20³0 nm的球形顆粒,VLP免疫組刺激小鼠產(chǎn)生抗體與滅活病毒組相似,流式及ELISPOT結(jié)果提示DENV4-VLP與滅活病毒組相似,用登革病毒抗原刺激后,分泌IFN-γ,TNF-α的細(xì)胞數(shù)目明顯增加,各組分泌IL-10細(xì)胞數(shù)目的整體水平均不高�！窘Y(jié)論】應(yīng)用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)成功表達(dá)獲得了DENV4-VLP,具有良好的免疫原性,可誘導(dǎo)Balb/C小鼠產(chǎn)生有效的體液免疫應(yīng)答,并能誘導(dǎo)Th1型免... 

【文章來源】：中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版). 2014,35(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒和細(xì)胞
    1.2 載體和宿主菌
    1.3 生物信息學(xué)軟件和資源
    1.4 主要試劑
    1.5 實(shí)驗(yàn)方法
    1.6 實(shí)驗(yàn)動物
    1.7 動物免疫
2 結(jié)果
    2.1 p GAPZ-spr M-D4的構(gòu)建及表達(dá)
    2.2 DENV4 VLP濃縮純化及滴度確定
    2.3 免疫血清抗原特異性抗體變化趨勢
    2.4 免疫小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞變化
    2.5 ELISPOT評價(jià)DENV4-VLP免疫小鼠的細(xì)胞免疫應(yīng)答
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]登革病毒3型病毒樣顆粒在酵母體內(nèi)的表達(dá)與鑒定[J]. 付春云,方丹云,劉巖,喻治準(zhǔn),江漢寧,江麗芳,周俊梅.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2011(06)

博士論文
[1]多價(jià)登革熱病毒樣顆粒疫苗的研究[D]. 張碩.中國疾病預(yù)防控制中心 2011



本文編號：3402762