本文關(guān)鍵詞：黃芪甲苷干預(yù)特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化模型大鼠肺組織中CD34、VEGF及Ang-2表達的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:本課題選擇黃芪甲苷作為研究藥物開展動物實驗研究,通過觀察博萊霉素制造肺間質(zhì)纖維化(IPF)模型大鼠不同時間點一般狀態(tài)、體重、肺系數(shù)、肺組織形態(tài)學(xué)及病理學(xué)變化,檢測血管內(nèi)皮細胞標(biāo)記物(CD34)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及血管生成素2(Ang-2)的表達強度,探討微血管新生在IPF發(fā)病機制中的作用,觀察黃芪甲苷對微血管新生促進因子表達的干預(yù)作用,探討黃芪甲苷干預(yù)大鼠IPF的作用及其作用機制,為中藥黃芪治療特發(fā)性肺纖維化提供理論依據(jù)。方法:130只SPF大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后,隨機抽取21只大鼠作為空白組,剩下109只采用改良氣管穿刺法推注BLM制造肺纖維化大鼠模型。隨機將造模成功的105只大鼠分為5組:模型組、激素組、黃芪甲苷高、中、低劑量組,每組均為21只。于造模次日開始灌胃給藥,在灌胃給藥后7d、14d、28d分批處死大鼠,采集、固定標(biāo)本。觀察IPF大鼠不同時間點一般狀態(tài)及肺組織大體形態(tài),稱量大鼠體重及肺質(zhì)量,比較大鼠體重及肺系數(shù)的變化。分別以HE、Masson染色鏡下觀察大鼠肺組織病理形態(tài)學(xué)變化,同時利用免疫組化技術(shù)SABC法及結(jié)合圖像分析系統(tǒng),檢測大鼠肺組織CD34、VEGF、Ang-2的表達。結(jié)果:1.大鼠一般狀態(tài)觀察空白組大鼠飲食、精神狀態(tài)良好,反應(yīng)靈敏,皮毛有光澤,呼吸平穩(wěn)。造模次日即可見各處理組大鼠精神萎靡不振,反應(yīng)遲鈍,活動明顯減少,弓背蜷縮,呼吸困難,喜群體扎堆。7d仍見模型組大鼠精神萎靡不振,活動明顯減少,豎毛,干枯無光澤,呼吸急促,飲食量明顯減少,身體消瘦,群體喜扎堆,在14d、28d的觀察中大鼠一般狀態(tài)未見好轉(zhuǎn)。7d、14d、28d激素組、黃芪甲苷低劑量組大鼠一般狀態(tài)優(yōu)于同期的模型組。黃芪甲苷高、中劑量組大鼠整體狀態(tài)均優(yōu)于同期的模型組、激素組及黃芪甲苷低劑量組,28d精神狀態(tài)良好,皮毛有光澤,飲食尚可,呼吸平穩(wěn),基本恢復(fù)正常。2.大鼠肺組織肉眼觀察7d、14d、28d空白組大鼠肺組織呈淡粉色,表面光滑,彈性良好,質(zhì)地均勻,結(jié)構(gòu)清楚。7d模型組大鼠肺組織明顯充血、水腫,色暗紅,表面粗糙,大片瘀點、瘀斑,出現(xiàn)大量凹凸不平的蒼白灶,病變程度重于其他各組;14d模型組大鼠肺組織顏色灰白,色澤暗淡,表面出現(xiàn)結(jié)節(jié)樣改變,肺組織變硬,彈性差,有實變區(qū),輕重不一;28d模型組大鼠肺組織體積縮小,質(zhì)地明顯變硬,表面凹凸不平,結(jié)節(jié)樣改變明顯,大片瘀斑。黃芪甲苷高、中、低劑量組及激素組明顯優(yōu)于同期的模型組,同時黃芪甲苷高、中劑量組優(yōu)于同期的黃芪甲苷低劑量組及激素組,而黃芪甲苷低劑量組病變均與同期的激素組接近。3.大鼠體重比較7d、14d、28d空白組大鼠體重逐漸增加(p0.05),且明顯大于同期的模型組、激素組、黃芪甲苷中、低劑量組(p0.01),而與黃芪甲苷高劑量組接近(p0.05)。7d、14d、28d模型組大鼠體重均小于同期的各處理組(p0.05),而黃芪甲苷高劑量組大鼠體重均大于同期激素組和黃芪甲苷中、低劑量組(p0.05),同時黃芪甲苷中劑量組大鼠體重大于同期激素組及黃芪甲苷低劑量組(p0.05),黃芪甲苷低劑量組與激素組之間體重?zé)o明顯差異(p0.05)。4.大鼠肺系數(shù)比較7d、14d、28d,空白組大鼠肺系數(shù)均小于同期各組(p0.05),且不同時間點肺系數(shù)無明顯變化(p0.05);而模型組大鼠肺系數(shù)明顯大于同期各組(p0.01);黃芪甲苷高劑量組明顯小于同期各組(p0.01);黃芪甲苷中劑量組大鼠肺系數(shù)均小于同期黃芪甲苷低劑量組及激素組(p0.05);黃芪甲苷低劑量組大鼠肺系數(shù)均與同期的模型組相當(dāng)(p0.05)。5.he染色、masson染色觀察結(jié)果空白組大鼠不同時間點肺組織形態(tài)未見病變。模型組:造模后7d大鼠肺組織結(jié)構(gòu)破壞、塌陷,伴有大量滲出物,肺泡間隔增寬明顯,大量炎性細胞浸潤,少量成纖維細胞及纖維細胞聚集;造模后14d肺泡炎癥較前減輕,同時成纖維細胞及纖維細胞大量增生,出現(xiàn)明顯肺間質(zhì)纖維化;造模后28d肺間質(zhì)纖維化病變更為明顯。與同期模型組相比,不同時間點黃芪甲苷高、中、低劑量組和激素組肺泡炎癥和肺間質(zhì)纖維化程度明顯降低。與激素組相比,不同時間點黃芪甲苷高、中劑量組肺泡炎癥和肺間質(zhì)纖維化程度降低。不同時間點黃芪甲苷低劑量組肺泡炎癥及肺間質(zhì)纖維化程度與同期激素組相當(dāng)。6.cd34因子表達結(jié)果7d、14d、28d三個時間點造模后各組大鼠肺組織中cd34表達強度均明顯高于空白組(p0.05),模型組大鼠肺組織中cd34表達強度明顯高于同期各用藥組(p0.01),黃芪甲苷高劑量組與中劑量組大鼠肺組織中cd34表達強度低于同期激素組和黃芪甲苷低劑量組(p㩳0.05),且黃芪甲苷高劑量組表達比黃芪甲苷中劑量組更低(p㩳0.05),而激素組大鼠肺組織cd34表達強度始終與同期黃芪甲苷低劑量組相當(dāng)(p0.05)。7.血管內(nèi)皮生長因子(vegf)表達結(jié)果7d、14d、28d三個時間點各處理組大鼠肺組織中vegf表達強度均明顯高于空白組(p0.05),模型組大鼠肺組織中vegf表達強度明顯高于同期各用藥組(P0.01),黃芪甲苷高劑量組與中劑量組大鼠肺組織中VEGF表達強度低于同期激素組和黃芪甲苷低劑量組(P㩳0.05),且黃芪甲苷高劑量組表達比黃芪甲苷中劑量組更低(P㩳0.05),而激素組大鼠肺組織VEGF表達強度始終與同期黃芪甲苷低劑量組相當(dāng)(P0.05)。8.血管生成素2(Ang-2)表達結(jié)果各實驗組與空白組相比,模型組大鼠肺組織Ang-2累積光密度值總和在7d、14d、28d均顯著增大(P0.01)。與模型組比較,各用藥組大鼠肺組織Ang-2在7d、14d、28d的表達明顯減弱(P0.01)。與激素組比較,黃芪甲苷高、中劑量組大鼠肺組織Ang-2在7d、14d、28d的表達減弱(P㩳0.05),且黃芪甲苷高劑量組弱于黃芪甲苷中劑量組(P㩳0.05)。黃芪甲苷低劑量組大鼠肺組織Ang-2累積光密度值總和在7d、14d、28d的表達均與同期激素組相當(dāng)(P㧐0.05)。結(jié)論:1.本實驗采用改良氣管穿刺法推注博萊霉素成功制造IPF大鼠模型。2.各實驗組大鼠IPF演變過程中,大鼠肺組織肺泡炎癥在造模后7d最為嚴重,14d肺泡炎癥逐漸消退,肺間質(zhì)纖維化已經(jīng)出現(xiàn)并逐漸發(fā)展,28d肺間質(zhì)纖維化更明顯。3.從CD34陽性表達可知,改良氣管穿刺法推注博萊霉素制造大鼠肺間質(zhì)纖維化的疾病演變過程中存在病理性微血管新生,在7d、14d、28d三個時間點的觀察過程中發(fā)現(xiàn),病理性微血管新生在14d最活躍,并伴隨大鼠肺間質(zhì)纖維化的整個病變過程。4.各實驗組大鼠IPF發(fā)病過程中,VEGF累積光密度值總和及Ang-2累積光密度值總和在7d、14d、28d均增強,且14d增強最明顯,說明VEGF及Ang-2通過促進病理性微血管新生而參與大鼠肺間質(zhì)纖維化發(fā)展,這可能是大鼠IPF發(fā)病的機制之一。5.黃芪甲苷能有效地抑制IPF大鼠肺組織中病理性微血管新生,從而達到干預(yù)大鼠IPF的作用,而且其干預(yù)效果與劑量相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化 黃芪甲苷 博萊霉素 病理性微血管新生
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563;R-332
【目錄】：

• 摘要6-9
• ABSTRACT9-14
• 英文縮略詞表14-16
• 前言16-19
• 一、實驗研究19-37
• 1.技術(shù)路線圖19-20
• 2.材料與方法20-21
• 2.1 實驗材料20-21
• 3.實驗方法21-24
• 3.1 實驗動物分組21
• 3.2 實驗動物模型制備21-22
• 3.3 給藥劑量和方法22
• 3.4 實驗動物標(biāo)本采集22
• 3.5 實驗指標(biāo)檢測22-23
• 3.6 肺組織病理損傷評分23
• 3.7 肺組織纖維化評分23
• 3.8 采用免疫組織化學(xué)法檢測CD34、VEGF及Ang-223-24
• 4.數(shù)據(jù)的統(tǒng)計與處理24
• 5.實驗結(jié)果24-37
• 5.1 大鼠一般狀態(tài)變化24-25
• 5.2 大鼠體重變化25-26
• 5.3 大鼠肺系數(shù)變化26-27
• 5.4 大鼠肺組織外觀形態(tài)變化27
• 5.5 大鼠肺組織HE染色和Masson染色鏡下觀察27-29
• 5.6 大鼠肺組織病理損傷評分比較29-30
• 5.7 大鼠肺組織纖維化評分比較30-31
• 5.8 大鼠肺組織CD34表達強度的比較31-33
• 5.9 大鼠肺組織VEGF表達強度的比較33-34
• 5.10 大鼠肺組織Ang-2 的表達強度比較34-37
• 二、討論37-42
• 1.IPF大鼠模型的建立37
• 2.黃芪甲苷對IPF大鼠一般狀態(tài)及體重的影響37-38
• 3.黃芪甲苷對IPF大鼠肺系數(shù)的影響38
• 4.黃芪甲苷對IPF大鼠肺組織形態(tài)學(xué)及病理學(xué)的影響38-39
• 5.黃芪甲苷對IPF大鼠肺組織CD34表達的干預(yù)作用39-40
• 6.黃芪甲苷對IPF大鼠肺組織VEGF表達的干預(yù)作用40
• 7.黃芪甲苷對IPF大鼠肺組織Ang-2 表達的干預(yù)作用40-41
• 8.黃芪甲苷的干預(yù)作用41-42
• 三、結(jié)語42-44
• 1．結(jié)論42
• 2．不足與展望42-44
• 參考文獻44-48
• 附錄48-60
• 附錄 1：大鼠肺組織HE染色鏡下觀察48-49
• 附錄 2：大鼠肺組織MASSON染色鏡下觀察49-50
• 附錄 3：大鼠肺纖維化病變發(fā)展圖片50-51
• 附錄 4：大鼠肺組織CD34免疫組化鏡下觀察51-52
• 附錄 5：大鼠肺組織VEGF免疫組化鏡下觀察52-53
• 附錄 6：大鼠肺組織Ang-2 免疫組化鏡下觀察53-54
• 附錄 7：實驗過程圖片54-55
• 附錄 8：實驗動物質(zhì)量合格證55-56
• 附錄 9：實驗動物設(shè)施使用證明56-57
• 附錄 10：黃芪甲苷檢測表57-60
• 文獻綜述60-71
• 一、中醫(yī)學(xué)對肺纖維化疾病的研究進展60-62
• 二、西醫(yī)對肺纖維化的研究進展62-68
• 參考文獻68-71
• 致謝71-72
• 在學(xué)期間主要研究成果72
• 1. 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文72
• 2. 在學(xué)期間參與的課題72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 謝海彬;李紅;沈明霞;繆天玲;劉敏;;改良氣管穿刺注射博萊霉素制作肺間質(zhì)纖維化大鼠模型實驗研究[J];甘肅中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2016年02期

2 梁月明;李敏菁;;VEGF、Ang-2與PET/CT SUVmax值在孤立性肺腫塊的表現(xiàn)及相關(guān)性[J];分子影像學(xué)雜志;2015年04期

3 陳曉莉;焦桂青;;Ang-2、VEGF在子宮內(nèi)膜異位癥中的表達[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2016年02期

4 宋寧;段林;;2015 ATS/ERS/JRS/ALAT特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化指南解讀[J];臨床薈萃;2015年09期

5 李少軍;張永紅;韓冬;劉璐;朱燕亭;馮維;李鳳娟;李滿祥;;COPD急性加重期血漿Ang-2的變化及臨床意義[J];中華肺部疾病雜志(電子版);2015年03期

6 徐維佳;邵興華;徐曉萍;姚菊芳;王琴;張敏芳;王玲;田磊;牟姍;倪兆慧;;黃芪甲苷通過調(diào)控p38 MAPK信號通路改善腎小管間質(zhì)纖維化[J];中華腎臟病雜志;2014年10期

7 陳燕華;胡海波;李寅;毛峪泉;臧建華;;經(jīng)改良的氣管插管注藥方法制備肺纖維化大鼠模型[J];世界中西醫(yī)結(jié)合雜志;2014年07期

8 石曉樂;曲妮妮;龐立建;劉創(chuàng);;特發(fā)性肺纖維化“肺腎陰虛、痰瘀伏絡(luò)”病機探識[J];吉林中醫(yī)藥;2014年03期

9 龔玲;劉代順;;特發(fā)性肺纖維化發(fā)病機制及血管新生作用的研究進展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報;2014年03期

10 張莉;朱雪;孟蕓;張雪玲;王國梁;張曉蕾;張偉;;肺間質(zhì)纖維化從腎論治[J];云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年01期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 萬云焱;重組人血管內(nèi)皮抑素在博來霉素誘導(dǎo)肺纖維化大鼠模型中的作用及機制研究[D];山東大學(xué);2013年

2 楊晗;基于TGF-β/Smad/ERK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的補陽還五湯拮抗肺纖維化機制研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2013年

3 張波;肺纖方干預(yù)肺纖維化大鼠微血管新生的實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2010年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 米爽;益氣通痹法治療特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化臨床和實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2012年

2 王秀英;六味地黃湯加減干預(yù)間質(zhì)性肺疾病激素減量過程（肺腎陰虛型）的相關(guān)臨床研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 伏蕊;完全摘除甲狀腺大鼠模型的建立[D];山東大學(xué);2009年

4 王海彤;肺纖維化的病因病機調(diào)查和中藥干預(yù)臨床研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2007年

  本文關(guān)鍵詞：黃芪甲苷干預(yù)特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化模型大鼠肺組織中CD34、VEGF及Ang-2表達的實驗研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：335024