本文關(guān)鍵詞：巨噬細胞特異性敲除Cdc42基因加重細菌脂多糖LPS誘導(dǎo)的小鼠炎癥反應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:炎癥反應(yīng)是機體對于外界刺激的一種防御反應(yīng),即機體對損傷因子引起的局部或全身發(fā)生的一系列復(fù)雜的免疫應(yīng)答過程。炎癥反應(yīng)參與了肥胖、動脈粥樣硬化等多種代謝性疾病和心血管疾病的病理進程。巨噬細胞作為重要的先天免疫防御細胞介導(dǎo)和參與了機體各個器官與組織中炎癥反應(yīng)。細胞分裂周期蛋白42(Cdc42蛋白)是Rho家族蛋白重要成員之一,Cdc42通過與GTP結(jié)合的活化狀態(tài)或與GDP結(jié)合的非活化狀態(tài)發(fā)揮分子開關(guān)的作用。活化的Cdc42通過PAKs、MRCKs、MLKs等多種激酶的調(diào)控進一步調(diào)節(jié)細胞極性,細胞骨架重構(gòu),增殖,遷移,粘附等生理過程。雖然Cdc42對炎癥反應(yīng)的影響已有一些研究,但巨噬細胞特異性敲除Cdc42基因?qū)ρ装Y反應(yīng)的影響還未見相關(guān)報道。本文旨在探討巨噬細胞缺失Cdc42對細菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響及其分子機制。方法與結(jié)果:1.特異性敲除巨噬細胞Cdc42小鼠的制備及鑒定:本研究利用Cdc42/FLOX小鼠與lyz-cre小鼠雜交制備特異性敲除巨噬細胞Cdc42小鼠。PCR結(jié)果顯示,已成功制備特異性敲除巨噬細胞Cdc42小鼠,Western Blot結(jié)果顯示基因敲除小鼠巨噬細胞Cdc42蛋白被敲除達90%。2.LPS誘導(dǎo)小鼠休克模型的制備及其檢測:腹腔注射脂多糖LPS(20mg/kg)于特異性敲除巨噬細胞Cdc42小鼠和對照組小鼠,觀察小鼠死亡情況,繪制死亡曲線,HE染色觀察肝、腎、肺、脾器官的損傷情況。同時檢測小鼠的血常規(guī)。結(jié)果顯示,LPS誘導(dǎo)巨噬細胞特異性缺失Cdc42小鼠的死亡率明顯增加,至給藥后第108小時實驗組與對照組死亡率分別為77.8%與44.4%。小鼠腹腔注射LPS 6h后,巨噬細胞特異性缺失Cdc42小鼠的肝、肺、腎、脾損傷更為嚴重,脾臟與體重比明顯高于對照組。血常規(guī)檢測表明,Cdc42特異性缺失小鼠白細胞與淋巴細胞數(shù)目顯著性高于對照組小鼠。3.Cdc42缺失對LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細胞細胞因子釋放的影響:每只小鼠腹腔注射4%硫膠質(zhì)溶液3-4m L,5天后收集腹腔巨噬細胞。小鼠腹腔巨噬細胞,采用100 ng/ml的LPS刺激12小時后QPCR檢測細胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的表達情況,并在細胞水平上對相關(guān)的信號通路進行研究。結(jié)果顯示,LPS刺激原代巨噬細胞12h,Cdc42特異性缺失小鼠巨噬細胞炎癥因子表達量顯著高于對照組。LPS刺激原代巨噬細胞16h,Cdc42特異性缺失小鼠巨噬細胞P-P38、P-NF-κB蛋白表達量高于對照組,P-ERK、P-PI3K、P-AKT蛋白的表達量低于對照組。結(jié)論:1.特異性敲除巨噬細胞Cdc42基因可顯著加重小鼠對LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的損傷。2.特異性敲除巨噬細胞Cdc42小鼠加重對LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的作用可能與激活CDC42缺失巨噬細胞的P38及NF-κB信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Cdc42蛋白 巨噬細胞 細菌脂多糖 細胞因子 MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R364.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文縮略詞10-11
• 第1章 緒論11-15
• 1.1 Cdc42的研究進展11-12
• 1.2 巨噬細胞與炎癥反應(yīng)12-14
• 1.2.1 炎癥反應(yīng)12-13
• 1.2.2 巨噬細胞在炎癥反應(yīng)過程中的作用13-14
• 1.3 Cdc42在炎癥反應(yīng)中的作用及其研究進展14
• 1.4 本研究的目的及意義14
• 1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析14-15
• 第2章 敲除小鼠巨噬細胞Cdc42對LPS引起的炎癥反應(yīng)的影響15-26
• 2.1 引言15
• 2.2 實驗材料和方法15-22
• 2.2.1 實驗動物15
• 2.2.2 Cdc42特異性敲除小鼠的制備15-18
• 2.2.3 原代腹腔巨噬細胞的提取及培養(yǎng)18-19
• 2.2.4 巨噬細胞炎癥因子的表達19-21
• 2.2.5 巨噬細胞Cdc42敲除在蛋白水平的鑒定21-22
• 2.3 實驗結(jié)果22-26
• 2.3.1 Cdc42基因敲除小鼠基因型鑒定結(jié)果22-23
• 2.3.2 巨噬細胞敲除Cdc42蛋白水平的鑒定結(jié)果23-24
• 2.3.3 特異性敲除巨噬細胞CDC42對LPS刺激誘導(dǎo)炎性細胞因子的影響24-26
• 第3章 巨噬細胞Cdc42敲除小鼠對LPS引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征的影響26-35
• 3.1 引言26
• 3.2 材料與方法26-28
• 3.2.1 內(nèi)毒素休克實驗26-27
• 3.2.2 LPS致使多器官損傷觀察27-28
• 3.2.3 小鼠血常規(guī)分析28
• 3.3 實驗結(jié)果28-35
• 3.3.1 內(nèi)毒素休克實驗小鼠死亡率28-29
• 3.3.2 小鼠脾臟體重比29-31
• 3.3.3 HE染色結(jié)果31-34
• 3.3.4 小鼠血常規(guī)分析34-35
• 第4章 Cdc42缺失在炎癥反應(yīng)中的作用及其分子機制35-45
• 4.1 引言35-38
• 4.2 實驗方法與材料38-41
• 4.2.1 腹腔原代巨噬細胞蛋白的提取38-39
• 4.2.2 免疫印記實驗39-41
• 4.3 實驗結(jié)果41-45
• 4.3.1 檢測巨噬細胞中P38、NF-κB的表達和磷酸化41-42
• 4.3.2 檢測巨噬細胞中ERK的表達及其磷酸化42-43
• 4.3.3 檢測巨噬細胞中PI3K、AKT等相關(guān)蛋白的表達及其磷酸化43-45
• 第5章 討論45-47
• 第6章 結(jié)論與展望47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻49-52
• 綜述52-56
• 參考文獻55-56

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 ;豚鼠巨噬細胞經(jīng)P_(204)處理后的抗石英細胞毒作用[J];國外醫(yī)學(xué)參考資料(衛(wèi)生學(xué)分冊);1976年04期

2 鄧俠進;;巨噬細胞的抗癌作用[J];遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1979年02期

3 陸天才;;疾病對肺巨噬細胞的影響[J];煤礦醫(yī)學(xué);1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一種分離巨噬細胞的簡單方法[J];濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1990年02期

5 謝志堅;巨噬細胞異質(zhì)性[J];醫(yī)學(xué)綜述;2001年06期

6 饒艷;運動及神經(jīng)內(nèi)分泌對巨噬細胞功能的調(diào)節(jié)[J];體育與科學(xué);2002年05期

7 朱金元;;吸煙對肺巨噬細胞的影響[J];浙江醫(yī)學(xué)教育;2003年01期

8 張俊峰;過氧化物酶體增殖物激活受體與單核/巨噬細胞系[J];醫(yī)學(xué)綜述;2004年03期

9 韋錦學(xué);顧軍;;巨噬細胞的激活誘導(dǎo)死亡[J];生命科學(xué);2006年02期

10 李曉曦;郭寧;曹雪濤;;腫瘤相關(guān)巨噬細胞促進腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的研究現(xiàn)狀[J];中國腫瘤生物治療雜志;2008年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

2 吳國明;周輝;;巨噬細胞和創(chuàng)傷纖維化[A];2009年浙江省骨科學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明質(zhì)酸對于淋巴結(jié)巨噬細胞運動的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

4 劉革修;歐大明;劉軍花;黃紅林;廖端芳;;丙丁酚在體外能抑制巨噬細胞脂質(zhì)氧化介導(dǎo)的低密度脂蛋白氧化并調(diào)節(jié)氧化巨噬細胞的分泌功能[A];面向21世紀的科技進步與社會經(jīng)濟發(fā)展（下冊）[C];1999年

5 葉金善;楊麗霞;郭瑞威;;環(huán)氧化酶-2/前列腺素E_2在血管緊張素Ⅱ刺激巨噬細胞表達細胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子中的作用[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 秦帥;陳希;孔德明;;構(gòu)建由綠色熒光標記巨噬細胞的轉(zhuǎn)基因斑馬魚系[A];貴州省中西醫(yī)結(jié)合內(nèi)分泌代謝學(xué)術(shù)會論文匯編[C];2012年

7 武劍華;徐惠綿;;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在胃癌中的相關(guān)研究[A];第9屆全國胃癌學(xué)術(shù)會議暨第二屆陽光長城腫瘤學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

8 何軍;;血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體升高巨噬細胞內(nèi)膽固醇水平[A];中華醫(yī)學(xué)會第11次心血管病學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢達;;PDT誘導(dǎo)的凋亡細胞對巨噬細胞NO合成的影響[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

10 張磊;朱建華;黃元偉;姚航平;;血管緊張素Ⅱ?qū)奘杉毎?THP-1重細胞)凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體表達的影響[A];浙江省免疫學(xué)會第五次學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2004年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

2 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

3 薛佳;免疫系統(tǒng)——人體的“衛(wèi)士”[N];保健時報;2009年

4 記者 胡德榮;鐵泵蛋白“維穩(wěn)”鐵代謝作用首次闡明[N];健康報;2011年

5 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質(zhì)量報;2003年

6 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

7 劉元江;新發(fā)現(xiàn)解釋腫瘤為何易成“漏網(wǎng)之魚”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

8 本報記者 侯嘉 通訊員 何新鄉(xiāng);今天你補硒了嗎[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

9 左志剛;升血小板藥使用注意[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2007年

10 記者 許琦敏;“鐵泵”蛋白幫助回收鐵元素[N];文匯報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周赤燕;巨噬細胞MsrA對動脈粥樣硬化的干預(yù)研究[D];武漢大學(xué);2013年

2 章桂忠;TIPE2蛋白調(diào)控細胞增殖和炎癥的機制研究[D];山東大學(xué);2015年

3 張瑜;DKK1抑制巨噬細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及其相關(guān)分子機制[D];山東大學(xué);2015年

4 孟濤;異丙酚對心臟收縮功能的抑制作用及其對巨噬細胞分泌功能調(diào)節(jié)的機制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 周興;基于酵母微囊構(gòu)建新型口服巨噬細胞靶向遞送系統(tǒng)的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 蔣興偉;Tim-3對巨噬細胞極化的調(diào)控機制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2015年

7 劉伯玉;清道夫受體A介導(dǎo)小鼠巨噬細胞吞噬鉤端螺旋體研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 楊紹俊;miRNA-155介導(dǎo)ESAT-6誘導(dǎo)巨噬細胞凋亡的分子機制及其在結(jié)核診斷中的作用[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 翟光耀;單核/巨噬細胞Ly6C~(low)亞群在心肌梗死后瘢痕形成期的抗炎特性研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

10 韓露;TRB3介導(dǎo)的脂肪組織巨噬細胞極化與糖尿病冠狀動脈病變關(guān)系的研究[D];山東大學(xué);2015年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張譯丹;鹽皮質(zhì)激素受體拮抗劑調(diào)控巨噬細胞表型對實驗性矽肺的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 盧文冉;HCV core蛋白作用的巨噬細胞培養(yǎng)上清對肝細胞生物學(xué)性狀的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

3 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細胞因子表達及分型的機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 曹爽;高糖對巨噬細胞TLR4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

5 寧程程;腫瘤相關(guān)巨噬細胞在子宮內(nèi)膜癌雌激素敏感性中的作用及機制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

6 高龍;PLD4在腫瘤相關(guān)巨噬細胞抑制結(jié)腸癌增殖中的作用研究[D];成都醫(yī)學(xué)院;2015年

7 丁弋娜;TLR4在肺癌相關(guān)巨噬細胞極性轉(zhuǎn)化及其調(diào)控機制的研究[D];杭州師范大學(xué);2016年

8 袁震;砷對巨噬細胞和肝細胞膽固醇流出及相關(guān)基因ABCA1和ABCG1表達的影響[D];杭州師范大學(xué);2016年

9 李曉琴;Fc99抑制單核/巨噬細胞表達Tenascin-C及緩解關(guān)節(jié)炎癥狀的研究[D];南京大學(xué);2014年

10 王凱凱;綠豆肽的結(jié)構(gòu)鑒定及對小鼠巨噬細胞免疫活性物質(zhì)的影響作用研究[D];黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：巨噬細胞特異性敲除Cdc42基因加重細菌脂多糖LPS誘導(dǎo)的小鼠炎癥反應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：334453