本文關(guān)鍵詞：巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42基因加重細(xì)菌脂多糖LPS誘導(dǎo)的小鼠炎癥反應(yīng)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:炎癥反應(yīng)是機(jī)體對(duì)于外界刺激的一種防御反應(yīng),即機(jī)體對(duì)損傷因子引起的局部或全身發(fā)生的一系列復(fù)雜的免疫應(yīng)答過(guò)程。炎癥反應(yīng)參與了肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化等多種代謝性疾病和心血管疾病的病理進(jìn)程。巨噬細(xì)胞作為重要的先天免疫防御細(xì)胞介導(dǎo)和參與了機(jī)體各個(gè)器官與組織中炎癥反應(yīng)。細(xì)胞分裂周期蛋白42(Cdc42蛋白)是Rho家族蛋白重要成員之一,Cdc42通過(guò)與GTP結(jié)合的活化狀態(tài)或與GDP結(jié)合的非活化狀態(tài)發(fā)揮分子開(kāi)關(guān)的作用�；罨腃dc42通過(guò)PAKs、MRCKs、MLKs等多種激酶的調(diào)控進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞極性,細(xì)胞骨架重構(gòu),增殖,遷移,粘附等生理過(guò)程。雖然Cdc42對(duì)炎癥反應(yīng)的影響已有一些研究,但巨噬細(xì)胞特異性敲除Cdc42基因?qū)ρ装Y反應(yīng)的影響還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。本文旨在探討巨噬細(xì)胞缺失Cdc42對(duì)細(xì)菌脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的影響及其分子機(jī)制。方法與結(jié)果:1.特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42小鼠的制備及鑒定:本研究利用Cdc42/FLOX小鼠與lyz-cre小鼠雜交制備特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42小鼠。PCR結(jié)果顯示,已成功制備特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42小鼠,Western Blot結(jié)果顯示基因敲除小鼠巨噬細(xì)胞Cdc42蛋白被敲除達(dá)90%。2.LPS誘導(dǎo)小鼠休克模型的制備及其檢測(cè):腹腔注射脂多糖LPS(20mg/kg)于特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42小鼠和對(duì)照組小鼠,觀察小鼠死亡情況,繪制死亡曲線(xiàn),HE染色觀察肝、腎、肺、脾器官的損傷情況。同時(shí)檢測(cè)小鼠的血常規(guī)。結(jié)果顯示,LPS誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞特異性缺失Cdc42小鼠的死亡率明顯增加,至給藥后第108小時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組死亡率分別為77.8%與44.4%。小鼠腹腔注射LPS 6h后,巨噬細(xì)胞特異性缺失Cdc42小鼠的肝、肺、腎、脾損傷更為嚴(yán)重,脾臟與體重比明顯高于對(duì)照組。血常規(guī)檢測(cè)表明,Cdc42特異性缺失小鼠白細(xì)胞與淋巴細(xì)胞數(shù)目顯著性高于對(duì)照組小鼠。3.Cdc42缺失對(duì)LPS誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞細(xì)胞因子釋放的影響:每只小鼠腹腔注射4%硫膠質(zhì)溶液3-4m L,5天后收集腹腔巨噬細(xì)胞。小鼠腹腔巨噬細(xì)胞,采用100 ng/ml的LPS刺激12小時(shí)后QPCR檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的表達(dá)情況,并在細(xì)胞水平上對(duì)相關(guān)的信號(hào)通路進(jìn)行研究。結(jié)果顯示,LPS刺激原代巨噬細(xì)胞12h,Cdc42特異性缺失小鼠巨噬細(xì)胞炎癥因子表達(dá)量顯著高于對(duì)照組。LPS刺激原代巨噬細(xì)胞16h,Cdc42特異性缺失小鼠巨噬細(xì)胞P-P38、P-NF-κB蛋白表達(dá)量高于對(duì)照組,P-ERK、P-PI3K、P-AKT蛋白的表達(dá)量低于對(duì)照組。結(jié)論:1.特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42基因可顯著加重小鼠對(duì)LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的損傷。2.特異性敲除巨噬細(xì)胞Cdc42小鼠加重對(duì)LPS誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的作用可能與激活CDC42缺失巨噬細(xì)胞的P38及NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Cdc42蛋白 巨噬細(xì)胞 細(xì)菌脂多糖 細(xì)胞因子 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R364.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文縮略詞10-11
• 第1章 緒論11-15
• 1.1 Cdc42的研究進(jìn)展11-12
• 1.2 巨噬細(xì)胞與炎癥反應(yīng)12-14
• 1.2.1 炎癥反應(yīng)12-13
• 1.2.2 巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)過(guò)程中的作用13-14
• 1.3 Cdc42在炎癥反應(yīng)中的作用及其研究進(jìn)展14
• 1.4 本研究的目的及意義14
• 1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析14-15
• 第2章 敲除小鼠巨噬細(xì)胞Cdc42對(duì)LPS引起的炎癥反應(yīng)的影響15-26
• 2.1 引言15
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料和方法15-22
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物15
• 2.2.2 Cdc42特異性敲除小鼠的制備15-18
• 2.2.3 原代腹腔巨噬細(xì)胞的提取及培養(yǎng)18-19
• 2.2.4 巨噬細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)19-21
• 2.2.5 巨噬細(xì)胞Cdc42敲除在蛋白水平的鑒定21-22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果22-26
• 2.3.1 Cdc42基因敲除小鼠基因型鑒定結(jié)果22-23
• 2.3.2 巨噬細(xì)胞敲除Cdc42蛋白水平的鑒定結(jié)果23-24
• 2.3.3 特異性敲除巨噬細(xì)胞CDC42對(duì)LPS刺激誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子的影響24-26
• 第3章 巨噬細(xì)胞Cdc42敲除小鼠對(duì)LPS引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征的影響26-35
• 3.1 引言26
• 3.2 材料與方法26-28
• 3.2.1 內(nèi)毒素休克實(shí)驗(yàn)26-27
• 3.2.2 LPS致使多器官損傷觀察27-28
• 3.2.3 小鼠血常規(guī)分析28
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-35
• 3.3.1 內(nèi)毒素休克實(shí)驗(yàn)小鼠死亡率28-29
• 3.3.2 小鼠脾臟體重比29-31
• 3.3.3 HE染色結(jié)果31-34
• 3.3.4 小鼠血常規(guī)分析34-35
• 第4章 Cdc42缺失在炎癥反應(yīng)中的作用及其分子機(jī)制35-45
• 4.1 引言35-38
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法與材料38-41
• 4.2.1 腹腔原代巨噬細(xì)胞蛋白的提取38-39
• 4.2.2 免疫印記實(shí)驗(yàn)39-41
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-45
• 4.3.1 檢測(cè)巨噬細(xì)胞中P38、NF-κB的表達(dá)和磷酸化41-42
• 4.3.2 檢測(cè)巨噬細(xì)胞中ERK的表達(dá)及其磷酸化42-43
• 4.3.3 檢測(cè)巨噬細(xì)胞中PI3K、AKT等相關(guān)蛋白的表達(dá)及其磷酸化43-45
• 第5章 討論45-47
• 第6章 結(jié)論與展望47-48
• 致謝48-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 綜述52-56
• 參考文獻(xiàn)55-56

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：334453