目的:探討骨髓間充質干細胞來源的外泌體對成骨細胞增殖和分化的影響。方法:體外分離培養(yǎng)骨髓間充質干細胞,超速離心法收集外泌體,并對成骨細胞進行刺激,細胞計數(shù)試劑盒（cell counting kit-8,CCK-8）法檢測骨髓間充質干細胞來源的外泌體對成骨細胞增殖的影響,堿性磷酸酶活性檢測及茜素紅染色觀察骨髓間充質干細胞來源的外泌體對成骨細胞礦化的影響,利用實時熒光定量聚合酶鏈反應（real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR）檢測成骨相關基因的表達。結果:骨髓間充質干細胞來源的外泌體促進成骨細胞的增殖,上調成骨相關基因的表達,提升堿性磷酸酶活性及促進鈣化結節(jié)的形成。結論:骨髓間充質干細胞來源的外泌體能夠促進成骨細胞的增殖和分化。 

【文章來源】：口腔醫(yī)學研究. 2019,35(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

圖１骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．

提取的物質為囊泡狀結構，粒徑大小在１００ｎｍ以下，符合外泌體的基本特征（圖３ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ結果顯示ＢＭＳＣｓ細胞上清中提取的物質表達ＣＤ６３以及Ａｌｉｘ等外泌體表面標志物（圖３ｂ）。１ａ：原代ＢＭＳＣｓ培養(yǎng)２４ｈ；１ｂ：原代ＢＭＳＣｓ培養(yǎng)７ｄ；１ｃ：原代ＢＭＳＣｓ培養(yǎng)１０ｄ圖１骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．２ａ：茜素紅染色；２ｂ：油紅Ｏ染色圖２ＢＭＳＣｓ的鑒定Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．３ａ：透射電鏡（×５００００）；３ｂ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ圖３ＢＭＳＣｓ來源外泌體的鑒定Ｆｉｇ．３ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅ．２．３ＢＭＳＣｓ來源外泌體促進成骨細胞增殖為了檢測ＢＭＳＣｓ來源的外泌體對成骨細胞增殖的影響，本文配置不同濃度的外泌體溶液，并繪制了５ｍｇ／Ｌ和１０ｍｇ／ＬＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ刺激下成骨細胞的生長曲線。ＣＣＫ－８結果顯示，加入ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ后，成骨細胞的增殖速度明顯提高，而且ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ濃度越高，增殖越明顯。上述結果證明ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ能夠有效地促進成骨細胞的增殖（圖４）。２．４ＢＭＳＣｓ來源外泌體促進成骨細胞的分化堿圖４ＢＭＳＣｓ來源的外泌體對成骨細胞增殖的影響Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏ－ｂｌａｓｔｓ．圖５ＢＭ

ＭＳＣｓ細胞上清中提取的物質表達ＣＤ６３以及Ａｌｉｘ等外泌體表面標志物（圖３ｂ）。１ａ：原代ＢＭＳＣｓ培養(yǎng)２４ｈ；１ｂ：原代ＢＭＳＣｓ培養(yǎng)７ｄ；１ｃ：原代ＢＭＳＣｓ培養(yǎng)１０ｄ圖１骨髓間充質干細胞的分離培養(yǎng)Ｆｉｇ．１ＩｓｏｌａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．２ａ：茜素紅染色；２ｂ：油紅Ｏ染色圖２ＢＭＳＣｓ的鑒定Ｆｉｇ．２ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ．３ａ：透射電鏡（×５００００）；３ｂ：Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ圖３ＢＭＳＣｓ來源外泌體的鑒定Ｆｉｇ．３ＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅ．２．３ＢＭＳＣｓ來源外泌體促進成骨細胞增殖為了檢測ＢＭＳＣｓ來源的外泌體對成骨細胞增殖的影響，本文配置不同濃度的外泌體溶液，并繪制了５ｍｇ／Ｌ和１０ｍｇ／ＬＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ刺激下成骨細胞的生長曲線。ＣＣＫ－８結果顯示，加入ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ后，成骨細胞的增殖速度明顯提高，而且ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ濃度越高，增殖越明顯。上述結果證明ＢＭＳＣｓ－ｅｘｏ能夠有效地促進成骨細胞的增殖（圖４）。２．４ＢＭＳＣｓ來源外泌體促進成骨細胞的分化堿圖４ＢＭＳＣｓ來源的外泌體對成骨細胞增殖的影響Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｏｓｔｅｏ－ｂｌａｓｔｓ．圖５ＢＭＳＣｓ來源的外泌體對成骨細胞堿性磷酸酶活性的影響Ｆｉｇ．５ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＢＭＳＣｓｄｅｒｉｖｅｄｅｘｏｓｏｍｅｏｎＡＬＰａｃｔｉｖｉｔ

【參考文獻】：
期刊論文
[1]銀杏葉提取物對成骨細胞分化的影響及相關機制研究[J]. 張曉曉,李婧,王俊妹,李彤,楊沫揚,吳哲.  口腔醫(yī)學研究. 2017(05)
[2]骨髓間充質干細胞復合脫細胞軟骨和富血小板血漿的體內成骨實驗[J]. 馮曉珂,董巖,李治冶,吳煒,趙銥民.  實用口腔醫(yī)學雜志. 2017(02)
[3]干細胞源外泌體治療缺血性心臟病的近況[J]. 何尤夫,石蓓.  臨床與病理雜志. 2017(02)
[4]骨髓間充質干細胞的旁分泌能影響成骨細胞生物學功能[J]. 李成,周海斌.  中國組織工程研究. 2014(10)



本文編號：3350089