目的:篩選核受體家族中對(duì)乙肝病毒（hepatitis B virus,HBV）增強(qiáng)子或核心啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性有影響的基因,初步研究生殖細(xì)胞核因子（germ cell nuclear factor,NR6A1）對(duì)HBV轉(zhuǎn)錄與復(fù)制的調(diào)控作用。方法:克隆帶有核受體家族基因的表達(dá)質(zhì)粒,與海腎熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒pcore-Rluc共轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染后檢測(cè)熒光素酶活性,篩選對(duì)增強(qiáng)子或核心啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性有影響的核受體基因。然后在Hep G2細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染HBV1.3倍體質(zhì)粒與NR6A1表達(dá)質(zhì)粒;通過Southern blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的HBV DNA;Northern blot檢測(cè)HBV RNA的轉(zhuǎn)錄情況。結(jié)果:篩選出對(duì)HBV增強(qiáng)子/核心啟動(dòng)子有明顯影響的基因NR6A1,其作用與對(duì)照組（空載和pcore-Rluc共轉(zhuǎn)染）相比,Rluc活性下降約80%,對(duì)照組為1.000±0.319,NR6A1組為0.198±0.009（P=0.000）。NR6A1過表達(dá)時(shí),BCP（核心啟動(dòng)子,PCH9-1744-Rluc）實(shí)驗(yàn)組熒光素酶活性相對(duì)值（0.504±0.023）較對(duì)照組（空載和PCH9-1744-Rluc共轉(zhuǎn)染,1... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,44(03)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

HepG2細(xì)胞中不同核受體基因過表達(dá)對(duì)熒光素酶活性的影響

=0.000），說明在HepG2細(xì)胞中過表達(dá)NR6A1可以明顯抑制HBVDNA的復(fù)制水平。2.5NR6A1在HepG2細(xì)胞中過表達(dá)抑制HBVRNA轉(zhuǎn)錄上述結(jié)果證明NR6A1能夠抑制HBVDNA復(fù)制。為了進(jìn)一步研究抑制作用是否是通過抑制HBVRNA轉(zhuǎn)錄水平所引起的，分別將NR6A1表達(dá)質(zhì)粒與HBV1.3（實(shí)驗(yàn)組）或者空載體與HBV1.3（對(duì)照組）共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，Northernblot檢測(cè)細(xì)胞總RNA。Northernblot結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組RNA表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組明顯下降（圖4），RNA表達(dá)灰度值相對(duì)定量a：與對(duì)照組比較，P＜0.05圖1HepG2細(xì)胞中不同核受體基因過表達(dá)對(duì)熒光素酶活性的影響圖2Westernblot檢測(cè)NR6A1過表達(dá)a：與對(duì)照組比較，P＜0.05圖3NR6A1過表達(dá)在HepG2細(xì)胞中可抑制HBVDNA復(fù)制相對(duì)熒光素酶活性1.51.00.50.0ControlNR1D2NR1I3NR6A1THRBRARGNR3C2NR1H2RORAaaaaaaaaNR6A1-3Flagβ-actin56kD43kDVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3NR6A1+HBV1.3Vector+HBV1.3Vector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3rcDNAssDNAcoreDNA12孔板6孔板1.51.00.50.0HBVDNA灰度值相比aVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3—292—

A的復(fù)制水平。2.5NR6A1在HepG2細(xì)胞中過表達(dá)抑制HBVRNA轉(zhuǎn)錄上述結(jié)果證明NR6A1能夠抑制HBVDNA復(fù)制。為了進(jìn)一步研究抑制作用是否是通過抑制HBVRNA轉(zhuǎn)錄水平所引起的，分別將NR6A1表達(dá)質(zhì)粒與HBV1.3（實(shí)驗(yàn)組）或者空載體與HBV1.3（對(duì)照組）共轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，Northernblot檢測(cè)細(xì)胞總RNA。Northernblot結(jié)果提示實(shí)驗(yàn)組RNA表達(dá)量相對(duì)于對(duì)照組明顯下降（圖4），RNA表達(dá)灰度值相對(duì)定量a：與對(duì)照組比較，P＜0.05圖1HepG2細(xì)胞中不同核受體基因過表達(dá)對(duì)熒光素酶活性的影響圖2Westernblot檢測(cè)NR6A1過表達(dá)a：與對(duì)照組比較，P＜0.05圖3NR6A1過表達(dá)在HepG2細(xì)胞中可抑制HBVDNA復(fù)制相對(duì)熒光素酶活性1.51.00.50.0ControlNR1D2NR1I3NR6A1THRBRARGNR3C2NR1H2RORAaaaaaaaaNR6A1-3Flagβ-actin56kD43kDVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3NR6A1+HBV1.3Vector+HBV1.3Vector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3rcDNAssDNAcoreDNA12孔板6孔板1.51.00.50.0HBVDNA灰度值相比aVector+HBV1.3NR6A1+HBV1.3—292—


本文編號(hào)：3331366