本文關(guān)鍵詞：兩株裂解性糞腸球菌噬菌體的分離鑒定及生物學特性分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：近年來,抗生素和免疫抑制劑的廣泛應用以及腸球菌多重耐藥菌株的不斷出現(xiàn),腸球菌引起的醫(yī)院內(nèi)感染逐漸增多。特別是艾滋病人、接受化療的癌癥患者、術(shù)后和器官移植病人易患腸球菌感染。在全球范圍內(nèi),腸球菌感染主要是由糞腸球菌和屎腸球菌引起。研究顯示,腸球菌對頭孢菌素的固有耐藥性、以及對萬古霉素耐藥性增加的趨勢,導致腸球菌感染的治療面臨諸多困難。噬菌體是一類能夠感染細菌的病毒,廣泛存在于自然界。利用裂解性噬菌體控制細菌感染的噬菌體療法又重新引起人們的關(guān)注。因此,積極開展腸球菌噬菌體生物學特性的研究和腸球菌感染的噬菌體療法,具有重要的現(xiàn)實意義和潛在的應用價值。 本項研究以12株糞腸球菌和8株屎腸球菌為宿主菌,從醫(yī)院污水站中分離出4株裂解性糞腸球菌噬菌體,分別命名為φEc-ZZ2、φEc-ZZ3、φEc-ZZ7和φEc-ZZ8。形態(tài)學觀察發(fā)現(xiàn),這4株新分離的噬菌體屬于有尾病毒目(Caudovirale order)中的長尾病毒科(Siphovridae)噬菌體。我們對噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8的生物學特性進行了初步研究,通過基因測序分析了噬菌體φEc-ZZ2的基因組。結(jié)果顯示：(1)噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8的頭部均呈立體對稱、直徑約40nm,尾部呈絲狀、長約200nm；(2)噬菌體φEc-ZZ2對20株腸球菌的裂解率為45%,而φ-ZZ8的裂解率為30%；(3)DNA限制性酶切圖譜表明：噬菌體φEc-ZZ2和φ-ZZ8基因組都含有Hind Ⅲ、EcoR Ⅴ、Nde Ⅰ和XbaI的酶切位點；(4)一步生長曲線表明,噬菌體φEc-ZZ2的潛伏期為10min,爆發(fā)量為100PFU/cell；噬菌體φEc-ZZ8的潛伏期為15min,爆發(fā)量為150PFU/cell；(5)SDS-PAGE蛋白電泳發(fā)現(xiàn),φEc-ZZ2有2條主要蛋白帶和5條次要蛋白帶,φEc-ZZ8有3條主要蛋白帶和至少8種次要蛋白帶,兩株噬菌體的相對分子質(zhì)量范圍都在10-130kDa之間；(6)在穩(wěn)定性試驗中,噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8在60℃30min后以及在pH4～10的范圍內(nèi)仍具有裂解宿主細胞的活性；(7)基因組測序發(fā)現(xiàn),φEc-ZZ2基因組大小為41,170bp,GC含量34.59%�；蚪M有59個基因(總長度為35,760bp,占基因組全長的86.86%),1個scaffold,1個contig,2個小衛(wèi)星序列,無微衛(wèi)星序列、無tRNA和rRNA。 通過對分離的糞腸球菌噬菌體的初步研究,獲得以下結(jié)論： 1.糞腸球菌噬菌體φEc-ZZ2、φEc-ZZ3、φEc-ZZ7和φEc-ZZ8為裂解性噬菌體,其形態(tài)學特征符合有尾病毒目(Caudovirale order)中的長尾病毒科(Siphoviridae family)噬菌體。 2.噬菌體φEc-ZZ2和φEc-ZZ8所具有的潛伏期短、裂解效率高、寬裂解譜以及在60℃和pH4-10條件下仍具有裂解活性等特征,為噬菌體療法應用于耐藥性腸球菌的感染提供了依據(jù)。 3.基因測序表明,噬菌體φEc-ZZ2基因組為雙鏈DNA,大小為41,170bp,GC含量34.59%�；蚪M有59個基因,總長度為35,760bp。
【關(guān)鍵詞】：噬菌體療法 噬菌體 腸球菌 耐萬古霉素腸球菌
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R378.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英語縮寫和中英文全稱對照表10-11
• 第1章 文獻回顧11-17
• 1、腸球菌概述11-12
• 2、噬菌體的發(fā)現(xiàn)及初期研究12-15
• 3、其他革蘭陽性球菌的噬菌體研究進展15-16
• 4、噬菌體研究的發(fā)展前景16-17
• 第2章 兩株裂解性糞腸球菌噬菌體的分離鑒定及生物學特性分析17-38
• 2.1 材料17-19
• 2.1.1 宿主菌17
• 2.1.2 主要試劑17-18
• 2.1.3 主要儀器18-19
• 2.2 方法19-24
• 2.2.1 腸球菌的準備19
• 2.2.2 標本的來源及其處理19
• 2.2.3 腸球菌噬菌體分離19-20
• 2.2.4 噬菌體的擴增及滴度的測定20
• 2.2.5 噬菌體電鏡觀察20-21
• 2.2.6 噬菌體交叉裂解試驗21
• 2.2.7 噬菌體穩(wěn)定性試驗21
• 2.2.8 噬菌體核酸的提取及酶切分析21-22
• 2.2.9 腸球菌噬菌體的SDS-PAGE凝膠電泳22-23
• 2.2.10 噬菌體最佳感染復數(shù)(MOI)的測定23
• 2.2.11 噬菌體吸收率試驗23-24
• 2.2.12 噬菌體一步生長曲線的測定24
• 2.3 結(jié)果24-36
• 2.3.1 腸球菌噬菌體的分離及擴增24-25
• 2.3.2 噬菌體的電鏡觀察25-27
• 2.3.3 噬菌體的交叉裂解結(jié)果27-28
• 2.3.4 噬菌體的穩(wěn)定性試驗結(jié)果分析28-30
• 2.3.5 噬菌體的核酸提取及酶切分析30-31
• 2.3.6 噬菌體蛋白的SDS-PAGE凝膠電泳31-32
• 2.3.7 最佳感染復數(shù)的測定32-33
• 2.3.8 噬菌體吸收率曲線的繪制33-34
• 2.3.9 噬菌體一步生長曲線的繪制34-36
• 2.4 討論36-38
• 第3章 噬菌體φEC-ZZ2的全基因組測序與分析38-48
• 3.1 測序樣品的準備38
• 3.2 樣品φEc-ZZ2的全基因組分析38-48
• 第4章 結(jié)論48-49
• 參考文獻49-54
• 作者簡介及在讀期間發(fā)表論文和參加課題54-55
• 致謝55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張文惠;安小平;范航;范華昊;李玉元;米志強;童貽剛;;一株糞腸球菌噬菌體的分離及其生物學特性研究[J];生物技術(shù)通訊;2013年04期

  本文關(guān)鍵詞：兩株裂解性糞腸球菌噬菌體的分離鑒定及生物學特性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：331729