本文關(guān)鍵詞：丁酸鹽對骨髓源樹突狀細(xì)胞的調(diào)控及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:在人和動物的腸道內(nèi),丁酸鹽(butyrate acid,Bu)作為最主要的短鏈脂肪酸(short chain fatty acids,SCFA)之一,是由食物中不消化的碳水化合物在腸腔內(nèi)經(jīng)厭氧菌酵解生成,與腸道內(nèi)微生物群共同形成腸道區(qū)域微環(huán)境,并且參與腸道免疫穩(wěn)態(tài)的維護(hù)。到目前為止,有關(guān)SCFA調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的分化、功能及機(jī)制方面尚缺乏研究,因此本研究觀察了Bu對免疫系統(tǒng)的重要參與者-骨髓源樹突狀細(xì)胞和體外誘導(dǎo)性粘膜樹突狀細(xì)胞的調(diào)控作用。方法:1.丁酸鹽對小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用(1)取骨髓細(xì)胞,破紅,計(jì)數(shù),鋪入6孔板。(2)培養(yǎng)至第七天,計(jì)數(shù),鋪入24孔板,LPS刺激其成熟及Bu處理,觀察形態(tài)。(3)流式檢測骨髓源樹突狀細(xì)胞(bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ及B7-DC的表達(dá)情況。(4)Q-PCR檢測BMDCs的IL-6、IL-12的m RNA水平表達(dá)情況。(5)格里斯反應(yīng)(Griess reaction)檢測細(xì)胞上清中NO的濃度。(6)流式檢測BMDCs誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞增殖的能力。(7)提蛋白,Westernblot檢測Bu處理各時間點(diǎn)(0min、15min、30min、60min)BMDCs中p-ERK的表達(dá)。2.丁酸鹽對RA誘導(dǎo)的小鼠骨髓源粘膜樹突狀細(xì)胞分化及功能的影響(1)取骨髓細(xì)胞,破紅,計(jì)數(shù),鋪入6孔板。(2)培養(yǎng)至第七天,第3天時加維甲酸(retinoic acid,RA)和丁酸鹽(Bu)處理,第七天時計(jì)數(shù),鋪入24孔板,LPS刺激其成熟,觀察形態(tài)。(3)流式檢測CD11b+CD11c+DC群體數(shù)。(4)熒光示蹤染料CFSE標(biāo)記后培養(yǎng)至第七天,流式檢測FSC、SSC及CFSE的變化。(5)流式檢測CCR9、α4β7、CD103及CD80、CD86、MHC-Ⅱ、B7-DC的表達(dá)情況。(6)流式檢測細(xì)胞醛脫氫酶(Aldehydedehydrogenase,ALDH)的活性。(7)Q-PCR檢測細(xì)胞的IL-6、IL-12、TNF-α及Nos2的m RNA水平;ELISA檢測上清中IL-12p70的含量。(8)流式檢測各組DCs誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞增殖的能力。(9)流式檢測各組DCs誘導(dǎo)Foxp3+Treg的能力。結(jié)果:(1)丁酸鹽可明顯下調(diào)成熟BMDCs表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ及B7-DC的表達(dá),抑制細(xì)胞因子IL-6、IL-12及NO的分泌,并且抑制BMDCs對OVA257-264抗原特異性CD8+T細(xì)胞的增殖。Westernblot檢測結(jié)果也顯示丁酸鹽抑制TLR4信號通路中ERK分子的磷酸化。(2)丁酸鹽會顯著下調(diào)粘膜DCs誘導(dǎo)過程中CD11c的表達(dá),上調(diào)粘膜DCs表面CCR9、α4β7及CD103的表達(dá),抑制粘膜DCs細(xì)胞ALDH的活性。經(jīng)RA誘導(dǎo)的骨髓源粘膜DCs或是正常誘導(dǎo)的BMDCs其誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞增殖的能力均會受到丁酸鹽的抑制,且正常誘導(dǎo)的BMDC所受的抑制更明顯。另外,RA誘導(dǎo)的骨髓源粘膜DCs更能促進(jìn)誘導(dǎo)Tregs的分化,而丁酸鹽對其的抑制效應(yīng)并不明顯。結(jié)論:對于BMDCs細(xì)胞,丁酸鹽可通過抑制TLR4信號通路中ERK分子磷酸化來下調(diào)BMDCs細(xì)胞的免疫功能;對于RA誘導(dǎo)的粘膜DCs細(xì)胞,丁酸鹽可下調(diào)其CD11c的表達(dá)且抑制其ALDH活性,而明顯上調(diào)其腸道歸巢受體及CD103的表達(dá)來促進(jìn)其向腸道的歸巢,由此可見丁酸鹽在粘膜DCs細(xì)胞回歸腸道定居中起重要作用;丁酸鹽對粘膜DCs誘導(dǎo)的抗原特異性T細(xì)胞增殖的抑制表明其可使T細(xì)胞呈現(xiàn)應(yīng)答低反應(yīng)性狀態(tài),對維持腸道免疫耐受發(fā)揮的重大作用;另外,RA對骨髓源DCs的誘導(dǎo)處理可明顯上調(diào)Tregs的分化,然而丁酸鹽的處理對粘膜DCs這一功能的影響并不明顯。綜上所述,丁酸鹽可促進(jìn)RA誘導(dǎo)的骨髓源粘膜DCs腸道歸巢、免疫低應(yīng)答性等特性的建立,因而能在維持腸道自穩(wěn)方面發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：短鏈脂肪酸 丁酸鹽 骨髓源樹突狀細(xì)胞 維甲酸 粘膜樹突狀細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-13
• 英文縮寫索引13-15
• 第一章 緒論15-25
• 1.1 丁酸鹽15-19
• 1.1.1 丁酸鹽的來源15
• 1.1.2 丁酸鹽的功能15-18
• 1.1.3 丁酸鹽的受體18-19
• 1.1.4 丁酸鹽對樹突狀細(xì)胞調(diào)控的研究現(xiàn)狀19
• 1.2 樹突狀細(xì)胞19-20
• 1.2.1 樹突狀細(xì)胞的分類19-20
• 1.2.2 樹突狀細(xì)胞的功能20
• 1.2.3 樹突狀細(xì)胞的表面分子20
• 1.3 腸道區(qū)域樹突狀細(xì)胞與腸道區(qū)域免疫穩(wěn)態(tài)20-22
• 1.3.1 腸道區(qū)域免疫20-21
• 1.3.2 腸道區(qū)域樹突狀細(xì)胞的分類與表型21-22
• 1.3.3 腸道區(qū)域樹突狀細(xì)胞的功能22
• 1.4 本研究的目的、方案設(shè)計(jì)及意義22-25
• 1.4.1 研究目的22
• 1.4.2 研究方法22-23
• 1.4.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)23-24
• 1.4.4 研究意義24-25
• 第二章 丁酸鹽對小鼠骨髓源樹突狀細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)作用25-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料25-27
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與試劑25-26
• 2.1.2 主要溶液的配置26
• 2.1.3 儀器與耗材26-27
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法27-31
• 2.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞的制備及骨髓源樹突狀細(xì)胞的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)27
• 2.2.2 細(xì)胞表面分子的標(biāo)記與檢測27-28
• 2.2.3 RNA的提取以及定量PCR檢測28-29
• 2.2.4 培養(yǎng)上清的收集及Griess反應(yīng)29
• 2.2.5 CD8+T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（體外）29-30
• 2.2.6 蛋白質(zhì)的提取30-31
• 2.2.7 Western Blotting31
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析31
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-37
• 2.3.1 丁酸鹽對BMDCs細(xì)胞的形態(tài)的影響31-32
• 2.3.2 丁酸鹽上調(diào)BMDCs細(xì)胞膜表面共刺激分子和MHC-Ⅱ表達(dá)32-33
• 2.3.3 丁酸鹽抑制BMDCs細(xì)胞IL-6、IL-12和NO的分泌33-34
• 2.3.4 丁酸鹽抑制BMDCs激活的抗原特異性CD8~+T細(xì)胞的增殖34-36
• 2.3.5 丁酸鹽抑制BMDCs細(xì)胞MAPK信號通路中ERK分子的磷酸化36-37
• 2.4 討論37-39
• 第三章 丁酸鹽對RA誘導(dǎo)的小鼠骨髓源粘膜樹突狀細(xì)胞分化及功能的影響39-56
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料39-40
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物與試劑39
• 3.1.2 主要溶液的配置39
• 3.1.3 儀器與耗材39-40
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法40-43
• 3.2.1 小鼠骨髓細(xì)胞的制備及骨髓源粘膜樹突狀細(xì)胞的體外誘導(dǎo)培養(yǎng)40
• 3.2.2 骨髓源粘膜樹突狀細(xì)胞分化效率的檢測40
• 3.2.3 細(xì)胞表面分子的標(biāo)記與檢測40
• 3.2.4 RNA的提取以及定量PCR檢測40-41
• 3.2.5 培養(yǎng)上清的收集及ELISA檢測上清中蛋白41
• 3.2.6 ALDEFLUOR染色檢測ALDH活性41-42
• 3.2.7 OVA抗原特異性CD4~+T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（體外）42
• 3.2.8 Foxp3+Treg誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)（體外）42
• 3.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析42-43
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果43-53
• 3.3.1 丁酸鹽對骨髓源粘膜DCs細(xì)胞分化后細(xì)胞數(shù)的影響43-44
• 3.3.2 丁酸鹽上調(diào)骨髓源粘膜DCs細(xì)胞表面腸道歸巢受體和CD103的表達(dá)44-45
• 3.3.3 丁酸鹽對骨髓源粘膜DCs細(xì)胞形態(tài)、大小及增殖的影響45-47
• 3.3.4 丁酸鹽下調(diào)骨髓源粘膜DCs細(xì)胞表面CD11c的表達(dá)47
• 3.3.5 丁酸鹽對骨髓源粘膜DCs細(xì)胞表面分子的影響47-48
• 3.3.6 丁酸鹽抑制骨髓源粘膜DCs細(xì)胞ALDH的活性48-49
• 3.3.7 丁酸鹽對骨髓源粘膜DCs細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響49-51
• 3.3.8 丁酸鹽抑制骨髓源粘膜DCs細(xì)胞激活的抗原特異性CD4~+T細(xì)胞的增殖51-52
• 3.3.9 丁酸鹽對骨髓源粘膜DCs細(xì)胞誘導(dǎo)Foxp3~+Tregs功能的影響52-53
• 3.4 討論53-56
• 第四章 主要結(jié)論和展望56-58
• 4.1 主要結(jié)論56-57
• 4.2 展望57-58
• 參考文獻(xiàn)58-65
• 綜述：反式維甲酸（RA）誘導(dǎo)粘膜樹突狀細(xì)胞模型的研究65-73
• 參考文獻(xiàn)71-73
• 致謝73-74
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章74

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔令平,劉妍,黃志勤;樹突狀細(xì)胞的特性與分化發(fā)育[J];贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2003年02期

2 趙謹(jǐn) ,王心;樹突狀細(xì)胞(dendritic cells)[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;2005年06期

3 張臨友,郭松,楊寶峰;激素與樹突狀細(xì)胞[J];國外醫(yī)學(xué)(移植與血液凈化分冊);2005年05期

4 吳萍萍;杜曉英;劉書遜;陳榮軍;壽張飛;陳江華;;不同來源人樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)誘導(dǎo)及鑒定[J];浙江醫(yī)學(xué);2007年09期

5 ;封面圖片——樹突狀細(xì)胞[J];中國廠礦醫(yī)學(xué);2009年04期

6 張錦X,陳海濱,謝慶東,王駿;人血樹突狀細(xì)胞形成細(xì)胞簇功能的體外觀察[J];解剖學(xué)雜志;1997年02期

7 曹華,張銳,裴雪濤;樹突狀細(xì)胞的生物學(xué)特性及臨床應(yīng)用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2000年06期

8 王黎明,劉艷榮,李金蘭,常艷,付家瑜,高暉,陳珊珊;人慢性粒細(xì)胞白血病樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2000年05期

9 夏青,張學(xué)軍;真皮樹突狀細(xì)胞與皮膚病[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊;2000年02期

10 劉青,金巖,吳織芬;樹突狀細(xì)胞與口腔疾病[J];牙體牙髓牙周病學(xué)雜志;2000年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔣應(yīng)明;萬濤;陳國友;夏大靜;周向陽;修方明;張意;曹雪濤;;樹突狀細(xì)胞來源的鈣粘著相關(guān)蛋白新基因的克隆、表達(dá)及功能研究[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

2 王勝軍;王麗莉;李堅(jiān);許化溪;;肺癌患者胸水中樹突狀細(xì)胞的誘導(dǎo)和初步鑒定[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

3 徐克成;牛立志;郭子倩;張德春;左建生;;樹突狀細(xì)胞及其在癌腫治療中應(yīng)用[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會第十五次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

4 何廣勝;邵宗鴻;和虹;劉鴻;施白;潔均;曹燕然;Q

本文編號：330772