目的構(gòu)建多房棘球絳蟲肌切蛋白（Em severin）基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體,并分析其對(duì)人正常肝細(xì)胞L02侵襲、遷移能力的影響。方法擴(kuò)增Em severin基因片段,并將其插入慢病毒載體pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP,構(gòu)建重組慢病毒pCDH-Em severin。用pCDH-Em severin感染293T細(xì)胞,進(jìn)行病毒包裝并檢測(cè)病毒滴度。以MOI=50的慢病毒感染人正常肝細(xì)胞L02,采用RT-qPCR和Western blot檢測(cè)Em severin mRNA和蛋白表達(dá)水平,并通過(guò)Transwell和劃痕試驗(yàn)檢測(cè)過(guò)表達(dá)Em severin對(duì)L02細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響。結(jié)果成功構(gòu)建重組慢病毒pCDH-Em severin,感染293T細(xì)胞并進(jìn)行包裝后,獲得滴度為1×10⁸ TU/ml的pCDH-Em severin慢病毒。RT-qPCR和Western blot檢測(cè)pCDH-Em severin感染組Em severin mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于空白組和空載病毒組（F值分別為98.731和86.074,P<0.05）。Transwell... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2019,14(03)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 質(zhì)粒、抗血清和細(xì)胞
        1.2 主要試劑和儀器
    2 方法
        2.1 Em severin過(guò)表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建
            2.1.1 Em severin基因的擴(kuò)增
            2.1.2 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP載體和Em severin基因PCR產(chǎn)物的雙酶切
            2.1.3 Em severin過(guò)表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定
        2.2 慢病毒包裝和滴度測(cè)定
            2.2.1 293T細(xì)胞培養(yǎng)
            2.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染及病毒液的收集
            2.2.3 熒光稀釋法測(cè)定病毒滴度
        2.3 L02細(xì)胞培養(yǎng)及慢病毒感染
            2.3.1 L02細(xì)胞培養(yǎng)
            2.3.2 慢病毒感染L02細(xì)胞
            2.3.3 RT-qPCR檢測(cè)L02細(xì)胞中Em severin mRNA表達(dá)
            2.3.4 Western blot檢測(cè)Em severin蛋白表達(dá)
        2.4 Transwell和劃痕試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移能力
            2.4.1 Transwell試驗(yàn)
            2.4.2 劃痕試驗(yàn)
        2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
結(jié) 果
    1 pCDH-Em severin重組慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定
    2 pCDH-Em severin慢病毒包裝與滴度測(cè)定
    3 RT-qPCR檢測(cè)Em severin mRNA表達(dá)
    4 Western blot檢測(cè)Em severin蛋白表達(dá)
    5 Em severin對(duì)人正常肝細(xì)胞侵襲、遷移能力的影響
討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]過(guò)表達(dá)BDNF基因重組慢病毒轉(zhuǎn)染MSCs的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 任瑞芳,趙君,貴永堃,閆海清,王昊亮,王桂華,張平.  中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2018(01)
[2]2012-2016年中國(guó)棘球蚴病抽樣調(diào)查分析[J]. 伍衛(wèi)平,王虎,王謙,周曉農(nóng),王立英,鄭燦軍,曹建平,肖寧,王瑩,朱曜宇,牛彥麟,薛垂召,曾祥嫚,房琦,韓帥,余晴,楊詩(shī)杰,付青,白雪飛,田添,李軍建,張夢(mèng)媛,吳文婷,張山山,侯巖巖,馮宇,馬宵,李斌,李凡卡,郭衛(wèi)東,楊亞明,吳向林,金小林,張紅衛(wèi),于石成.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2018(01)
[3]我國(guó)棘球蚴病疾病負(fù)擔(dān)分析[J]. 張夢(mèng)媛,伍衛(wèi)平,官亞宜,王立英,侯巖巖,馮宇,馬俊英,王謙,王瑩,韓帥,薛垂召,吳文婷.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2018(01)
[4]華支睪吸蟲脂肪酸結(jié)合蛋白CsFABP對(duì)巨噬細(xì)胞免疫功能的影響[J]. 華慧,張波,李向陽(yáng),顏超,劉瀛,于倩,湯仁仙,鄭葵陽(yáng).  中國(guó)病原生物學(xué)雜志. 2017(11)
[5]HEPN1過(guò)表達(dá)慢病毒的構(gòu)建及對(duì)人泌乳素型垂體瘤細(xì)胞的影響[J]. 馮杰,夏祥國(guó),陳禮剛,陳銳,江勇,張彪,宋志富.  東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017(03)
[6]人TPX2基因過(guò)表達(dá)慢病毒質(zhì)粒的構(gòu)建及其人宮頸癌細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)株的篩選[J]. 常海平,楊彩榮,鄭健.  中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2017(06)
[7]慢病毒介導(dǎo)的CIB1過(guò)表達(dá)對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖和周期影響[J]. 李慧,惠玲,李君紅,王曉輝,桑春艷,張富婷,周杰.  中華腫瘤防治雜志. 2017(06)
[8]慢病毒介導(dǎo)的調(diào)節(jié)因子XⅠ過(guò)表達(dá)及其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的抑制作用[J]. 程凱,孫浩杰,張明智,沈麗.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2016(11)
[9]多房棘球蚴病的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 黃紅,張淑坤.  中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào). 2016(07)
[10]敲低肌切蛋白可抑制胃腸道間質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力[J]. 劉軍言,劉佳佳,吳益西,陳騫,林勇,錢鋒.  第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(12)

博士論文
[1]Scinderin基因在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移中的相關(guān)功能研究[D]. 吳海福.復(fù)旦大學(xué) 2010



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