本課題在胡川閩博士構建的鼠抗人肝癌單克隆抗體HAb25的部分輕鏈缺失的單鏈抗體的基礎上，以完整的輕鏈可變區(qū)基因替換原部分缺失的輕鏈可變區(qū)基因，重新構建了鼠抗人肝癌單鏈抗體（mscFv），將其與檢測標簽E-tag偶連并在原核表達載體pET15b中獲得高效融合表達，表達產物（mscFv-E-tag）經初步純化后進行的活性檢測結果顯示，mscFv較好地保持了親本抗體HAb25的抗原結合特異性和親和性。在此基礎上，將mscFv及其經過人源化改造的抗人肝癌單鏈抗體（hscFv，由軍事醫(yī)學科學院袁清安博士構建）分別與人腫瘤壞死因子α（TNFα）基因偶連，分別構建了PGEX 4T-1 m／hscFv-TNFα抗肝癌雙功能抗體的原核融合表達載體，并實現(xiàn)了高效表達，表達產物經純化后進行的活性檢測結果顯示，m／hscFv-TNFα均保持了親本抗體HAb25的抗原結合特性，并對靶細胞（SMMC-7721）具有明確的選擇性殺傷作用，進一步的荷肝癌（SMMC-7721）裸鼠體內抑瘤實驗結果表明，m／hscFv-TNFα均具有明確的導向殺傷作用。 一、抗肝癌單鏈抗體的重新構建、表達及其活性檢測 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

mscFv誘導表達產物的SDS一PAGE

8.hscFv的活性檢測hsFcv競爭結合抑制實驗結果表明hsFcv能與靶細胞特異性結合并封閉親本抗體42%的親和活性，SABC法測定結果與mscFv的結果一致，表明mscFv人源化后仍較好地保持了親本杭體的特異性和親和活性，具有與mscFv基本相同的活性。

16mscFv誘導表達產物SDSPAGE的光密度掃描結45夕2/seOOBC萬一檔’“嘿一，‘’川路“‘’‘獷能”生貓召圖1.8mscFv的競爭結合抑制曲線性對照組，B為mscFv封閉實驗組，C為HAb25陽性對

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3299707