本文關(guān)鍵詞：兔X-連鎖低血磷性佝僂病模型的建立，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：低血磷性佝僂病(hypohosphatemicrickets,HR),是一種由腎臟排磷增多,導(dǎo)致低磷血癥及骨礦化障礙性疾病。其中X-連鎖低磷血癥(XLH)是最常見的遺傳形式,發(fā)病率高達1:20000。其臨床表現(xiàn)為低磷血癥,低1,25羥維生素D及堿性磷酸酶活性升高,同時伴隨身材矮小,骨骼及牙齒發(fā)育等異常。研究表明,XLH的致病機理為PHEX基因突變。目前已經(jīng)建立了XLH基因的突變數(shù)據(jù)庫(http://www.phe-xdb.mcgill.ca),已報道常見的突變類型有錯義突變、移碼突變、無義突變及剪切突變等368種。PHEX基因位于X染色體上,屬于M13膜結(jié)合鋅金屬內(nèi)肽酶家族的成員,為含有22個外顯子,編碼749個氨基酸的蛋白質(zhì)。其主要參與調(diào)節(jié)體內(nèi)磷酸鹽平衡,骨骼礦化,腎臟無機磷以及維生素D代謝。因此,對致病基因PHEX的研究將有助于功能分析以及其對骨骼礦化、腎臟磷轉(zhuǎn)運、活化維生素D生成的影響,從而進一步闡釋XLH的病理生理機制。近年來,隨著人類對疾病認識的不斷深入,發(fā)現(xiàn)大部分疾病均與基因突變有關(guān),但對于疾病的發(fā)病機制尚不明確,且缺少有效的治療措施。因此,建立更好的模擬人類疾病癥狀的動物模型、篩選有效的藥物和治療方法迫在眉睫。目前,小鼠疾病模型已被廣泛應(yīng)用于人類疾病發(fā)病機理的研究及藥物篩選。然而,由于小鼠與人類機體在生理特性和基因表達等方面存在差異,其不能完全模擬人類疾病。兔作為一種經(jīng)典的動物模型,其與小鼠和大鼠相比,具有與人類更為相似的生理學(xué),解剖學(xué)和遺傳學(xué)等特點;與豬及猴相比,其需要較低的飼養(yǎng)費用和較短的妊娠周期。因此,兔疾病模型的構(gòu)建,將為更好的模擬人類代謝性疾病提供可靠、理想的動物模型。目前,CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)已成為炙手可熱的基因編輯工具,該技術(shù)具有設(shè)計簡單,使用方便及可對靶基因進行精確修飾等優(yōu)點,已成功應(yīng)用于小鼠,豬,大鼠,斑馬魚及山羊等動物的基因組編輯。該技術(shù)的廣泛應(yīng)用將為人類重大疾病動物模型的構(gòu)建奠定相關(guān)理論及實驗基礎(chǔ)。盡管PHEX突變小鼠模型已報道,且模擬了人類XLH的發(fā)病機制,但對于該病手術(shù)治療和臨床藥物篩選的安全評估并沒有合適的動物模型。因此,本實驗成功構(gòu)建PHEX基因打靶載體,通過Cas9/sg RNA m RNA注射法獲得PHEX基因敲除兔。研究結(jié)果表明,與正常兔相比,PHEX基因敲除兔具有生長遲緩,低血磷,高FGF23以及骨礦化等典型的XLH臨床癥狀。綜上所述,本研究利用CRISPR/Cas9技術(shù),成功構(gòu)建了PHEX基因敲除兔,其可用于XLH疾病的預(yù)防治療,以及為藥物篩選提供可靠的疾病動物模型。
【關(guān)鍵詞】：CRISPR/Cas9 兔 XLH PHEX 藥物篩選
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R591.44;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文縮寫詞表10-11
• 引言11-13
• 第一篇 文獻綜述13-26
• 第1章 CRISPR/Cas9技術(shù)研究進展13-20
• 1.1 CRISPR/Cas9技術(shù)發(fā)展史13-14
• 1.2 CRISPR/Cas的結(jié)構(gòu)14-15
• 1.3 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的作用機制15-16
• 1.4 CRISPR/Cas9技術(shù)的應(yīng)用16-18
• 1.5 CRISPR/Cas9技術(shù)的展望18-19
• 1.6 結(jié)語19-20
• 第2章 X-連鎖低血磷性佝僂病研究概述20-26
• 2.1 低血磷性佝僂病的分類20-22
• 2.2 機體內(nèi)磷酸鹽穩(wěn)態(tài)22-24
• 2.3 X-連鎖低血磷性佝僂病致病基因的研究24
• 2.4 PHEX基因敲除小鼠24-25
• 2.5 結(jié)語25-26
• 第二篇 研究內(nèi)容26-56
• 第1章 PHEX基因敲除兔模型的構(gòu)建26-45
• 1.1 材料26-28
• 1.2 方法28-38
• 1.3 結(jié)果38-44
• 1.4 討論44
• 1.5 小結(jié)44-45
• 第2章 兔X-連鎖低血磷性佝僂病模型的鑒定45-56
• 2.1 材料45
• 2.2 方法45-49
• 2.3 結(jié)果49-54
• 2.4 討論54-55
• 2.5 小結(jié)55-56
• 結(jié)論56-57
• 參考文獻57-67
• 導(dǎo)師簡介67-68
• 作者簡介及攻讀碩士期間所發(fā)表的論文68-69
• 致謝69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王夢瑤;楊亦農(nóng);邊紅武;;基于CRISPR-Cas系統(tǒng)的基因組定點修飾新技術(shù)[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2014年05期

2 方銳;暢飛;孫照霖;李寧;孟慶勇;;CRISPR/Cas9介導(dǎo)的基因組定點編輯技術(shù)[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2013年08期

3 Chuanxian Wei;Jiyong Liu;Zhongsheng Yu;Bo Zhang;Guanjun Gao;Renjie Jiao;;TALEN or Cas9-Rapid,Efficient and Specific Choices for Genome Modifications[J];Journal of Genetics and Genomics;2013年06期

  本文關(guān)鍵詞：兔X-連鎖低血磷性佝僂病模型的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：327767