粒系集落刺激因子（granulocyte colony-stimulating factors，G-CSF），具有特異地刺激和調(diào)節(jié)粒細(xì)胞系統(tǒng)的增殖、分化、存活和活化等作用，因此在放射性損傷的救治以及腫瘤患者放化療等方面具有良好的應(yīng)用前景。但G-CSF也與體內(nèi)炎癥等嚴(yán)重病理過程中嗜中性白細(xì)胞的大量增加和激活有關(guān)。后者又可因“呼吸暴發(fā)”效應(yīng)釋放大量氧自由基等成份，在清除異己的同時(shí)，對自身組織也產(chǎn)生影響。保持體內(nèi)粒細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡是對一些臨床疾病診治的重要環(huán)節(jié)，其中研制和應(yīng)用抗G-CSF抗體也將是一個(gè)重要方面。本研究利用90年代以來發(fā)展起來的在基因工程抗體領(lǐng)域具有重大突破的全套噬菌體抗體表面表達(dá)技術(shù)，對抗G-CSF單鏈抗體（ScFv）進(jìn)行了研究。從人重組G-CSF免疫的小鼠脾細(xì)胞中提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄成cDNA后，用抗體可變區(qū)PCR混合引物進(jìn)行全套抗體V_H、V_L擴(kuò)增，經(jīng)重疊延伸反應(yīng)在體外隨機(jī)裝配成ScFv。將其克隆至噬菌粒載體pCANTAB 5E中。電轉(zhuǎn)化含Sup E的E．coli菌株，以輔助噬菌體M13KO7超感染噬菌粒文庫，構(gòu)建成全套ScFv基因... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：102 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

pCANTABSE測序引物實(shí)驗(yàn)中所用各種限制性內(nèi)切酶以及其它有關(guān)分子生物學(xué)試劑均為BoehrnigerManneim公司、pharmaeia公司、Biolabs公司或華美公司產(chǎn)品

加入針對鼠IgV區(qū)基因不同家族的重鏈和‘輕鏈可變區(qū)引物進(jìn)行PCR，即得到了全套杭體重鏈可變區(qū)基因(VHgeneerPertoier)和全套杭體輕鏈可變區(qū)基因(VLgenerepertoire)。電泳結(jié)果見圖9。結(jié)果顯示擴(kuò)增出的VH、VL(VK)基因片段約為35b0p左右，VH基因略大于VL基因片段，與預(yù)期的片段大小相符，非一42一

517bP—圖10全套ScFv基因的PCR擴(kuò)增結(jié)果SeFv:SeFv基因擴(kuò)增產(chǎn)抽;M:pBR322/Hinfl大量單菌落形成。從連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化菌平皿上隨機(jī)挑選了22個(gè)單菌菌拉DNA，以EcoRI、Hnidl酶切鑒定，有15個(gè)單菌落所提噬菌了約為2.Ikb左右的條帶(含有外源插段)與預(yù)測結(jié)果一致，(見圖個(gè)單菌落則小于或無2.kIb之條帶，表明無大小正確的外源片段的12)。以上結(jié)果表明克隆基本成功。將所有菌落沖洗下來收集，進(jìn)行達(dá)。123456789101112131415M

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]單純化療與并用粒細(xì)胞集落刺激因子對白血病患者的療效比較[J]. 陳書長,張之南,劉沛新,郭小清,毋永娟.  中華內(nèi)科雜志. 1996(04)
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[3]溶血與非溶血時(shí)血漿及紅細(xì)胞過氧化氫誘發(fā)化學(xué)發(fā)光值比較[J]. 賈松惠,李立文,孫志東,路文勝,溫光楠.  中國病理生理雜志. 1995(03)



本文編號(hào)：3257094