目的原核表達(dá)并純化寨卡病毒（Zika virus）E蛋白第三結(jié)構(gòu)域（ZK-EⅢ）重組蛋白,并制備其多克隆抗體。方法 PCR擴(kuò)增ZK-E Ⅲ序列,經(jīng)雙酶切后將其插入原核表達(dá)載體p ET-32a（+）中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pET-ZKE Ⅲ,轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌（E. coli）Rosetta2（DE3）,經(jīng)IPTG誘導(dǎo),表達(dá)的重組蛋白經(jīng)親和層析和陰離子交換層析純化后,免疫家兔,制備ZK-E Ⅲ多克隆抗血清,進(jìn)行Western blot鑒定后,ELISA法檢測(cè)該抗血清效價(jià)。結(jié)果經(jīng)PCR及測(cè)序鑒定證明原核表達(dá)質(zhì)粒pET-ZKE Ⅲ構(gòu)建正確,表達(dá)的重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約31 000,主要以可溶性形式存在,表達(dá)量占菌體總蛋白的60%;用純化的重組蛋白免疫家兔后,獲得的血清特異性良好,血清效價(jià)為1∶51 200。結(jié)論 ZKE Ⅲ蛋白在E. coli中以可溶性形式表達(dá),制備的抗血清特異性好,效價(jià)高,具有用于寨卡病毒診斷和進(jìn)行重組亞單位疫苗開發(fā)的潛力。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)生物制品學(xué)雜志. 2019,32(06)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、質(zhì)粒及細(xì)胞
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    1.4 原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)條件的優(yōu)化及可溶性分析
    1.6 目的蛋白的純化
    1.7 多克隆抗體的制備及鑒定
        1.7.1 多克隆抗體的制備
        1.7.2 Western blot鑒定
        1.7.3 抗血清效價(jià)的檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 原核表達(dá)質(zhì)粒的鑒定
    2.2 表達(dá)產(chǎn)物的鑒定
    2.3 純化產(chǎn)物的鑒定
    2.4 多克隆抗體的鑒定
    2.5 兔抗血清的效價(jià)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]中國(guó)大陸首例輸入性寨卡病毒感染病例風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J]. 劉曉青,謝春燕,楊富強(qiáng),黃星魁,廖勇,張?zhí)扈?李建華,胡國(guó)良,袁輝.  中華疾病控制雜志. 2016(05)
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