目的：人工合成胸腺素α1（thymosin alphal，Tα1）三串體（Tα1③）的串聯(lián)基因及Ta1和Ref（一種P1噬菌體蛋白）的重組基因，克隆至原核表達(dá)載體，構(gòu)建高表達(dá)菌株，利用基因工程方法實(shí)現(xiàn)Tα1三串體及Ref-Tα1重組蛋白的高效表達(dá)，并進(jìn)行目的蛋白的純化及生物學(xué)活性的鑒定。方法：使用大腸桿菌偏愛(ài)密碼子，人工合成Tαl③和Ref-Tα1基因，并分別克隆在表達(dá)載體pET-22b（+）和pBV220中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21（DE3）和DH5α，通過(guò)加入IPTG及控制溫度誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)的目的蛋白分別經(jīng)DEAE-Sepharose FF陰離子柱及CM-Sepharose FF陽(yáng)離子柱進(jìn)行純化，Western-blot進(jìn)行鑒定，體外淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)進(jìn)行生物學(xué)活性測(cè)定。結(jié)果：PCR分別擴(kuò)增出280bp和360bp的DNA片段，將其克隆入pET-22b（+）和pBV220中，酶切和測(cè)序鑒定正確。用IPTG及溫控分別誘導(dǎo)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的大腸桿菌BL21（DE3）和DH5α，各得到大小約10KD和15KD的串聯(lián)及重組蛋白，合成的蛋白以可溶性形式存在，培養(yǎng)的細(xì)菌經(jīng)收集、裂解后，合成的目的蛋白釋放... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

SDS一PAGE分析Ref-Tal在大腸桿菌中的表達(dá).

重組蛋白R(shí)ef-Tal免疫印跡分析

Tal③基因的PCR鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組胸腺素α1的表達(dá)、純化和生物學(xué)活性[J]. 苗紅,郭葆玉,張冉,張莉.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2003(05)
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[3]重組胸腺素α1的克隆、表達(dá)與純化[J]. 薛曉暢,顏真,石繼紅,韓葦,張英起.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2001(03)
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本文編號(hào)：3239321