為獲得銅綠假單胞菌外膜蛋白OprD并研究其分子功能。本研究采用分子克隆構(gòu)建OprD蛋白重組表達(dá)菌株,用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法獲得OprD菌株的最優(yōu)表達(dá)條件和培養(yǎng)條件,通過(guò)SDS-PAGE切膠的方法純化OprD蛋白,小鼠免疫制備OprD多克隆抗血清,蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)抗血清的特異性。使用DNAMan和MEGA軟件對(duì)OprD蛋白進(jìn)行同源性和系統(tǒng)發(fā)生分析。結(jié)果表明,OprD重組載體雙酶切、DNA測(cè)序鑒定結(jié)果、OprD蛋白表達(dá)與純化條帶大小分別與預(yù)測(cè)相符。正交試驗(yàn)獲得OprD菌株的最優(yōu)培養(yǎng)條件為:葡萄糖濃度為0,轉(zhuǎn)速230r/min,裝液量為50mL;最優(yōu)表達(dá)條件為:菌液OD600=0.8時(shí)加入終濃度為0.3mmol/L的異丙基β-D-1-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）,37℃誘導(dǎo)12h。SDS-PAGE電泳切膠純化獲得純度較高的OprD蛋白。蛋白質(zhì)印跡法證實(shí)OprD蛋白抗血清具有較好的特異性。OprD蛋白序列系統(tǒng)發(fā)生分析發(fā)現(xiàn),同菌屬細(xì)菌存在較高的同源性,并且親緣關(guān)系較近的細(xì)菌中OprD蛋白可能具有相似的分子功能。 

【文章來(lái)源】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2019,42(01)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
    1.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.3 OprD重組蛋白的表達(dá)鑒定及純化
    1.4 OprD重組蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化
    1.5 多克隆抗體制備
    1.6 Western blotting
    1.7 OprD蛋白生物信息學(xué)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 OprD蛋白進(jìn)化關(guān)系分析
    2.2 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    2.3 重組蛋白的表達(dá)檢測(cè)與純化
    2.4 OprD表達(dá)菌株最優(yōu)培養(yǎng)條件的正交試驗(yàn)
    2.5 OprD表達(dá)菌株誘導(dǎo)條件的正交試驗(yàn)
    2.6 Western blotting
3 結(jié)論與討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3237033