本研究將含有人乳鐵蛋白（HLF）基因2366bp cDNA序列完整序列和800bp的奶山羊β-乳球蛋白基因5’端調(diào)控序列的乳腺特異表達(dá)重組載體pLNCXHLF按常規(guī)方法提取、純化、PCR、酶切鑒定后，用于細(xì)胞表達(dá)和精子介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因動物的研究。 利用脂質(zhì)體包裹重組質(zhì)粒pLNCXHLF，導(dǎo)入到小鼠乳腺癌細(xì)胞株MA-782中，G418及PCR篩選獲得陽性單克隆細(xì)胞。轉(zhuǎn)染細(xì)胞利用海藻酸鈉固定化包埋培養(yǎng)，同時加入激素誘導(dǎo)。誘導(dǎo)后，培養(yǎng)液上清通過Western-blotting分析證明，轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá)并分泌出人乳鐵蛋白，分子量為34KD；ELISA檢測重組蛋白最高表達(dá)量為65mg／L培養(yǎng)基／10⁵細(xì)胞；抗菌實(shí)驗(yàn)表明，所獲得的重組人乳鐵蛋白具有抑制大腸桿菌生長的作用，而且比人乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品作用更強(qiáng)。 采用直接注射的方法，將脂質(zhì)體包裹的含人乳鐵蛋白基因的重組質(zhì)粒pLNCXHLF注入兔睪丸組織和羊輸精管中，進(jìn)行轉(zhuǎn)基因動物制備研究。所產(chǎn)F1代仔兔均為活體，經(jīng)PCR和Southern檢測，轉(zhuǎn)基因陽性率相對較高（35％），而且雄體的這種能力保持的時間也很長（注射后七個月，仍可通過... 

【文章來源】：遼寧師范大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

Fl/RlpCR系統(tǒng)表達(dá)載體pLNexHLF鑒定結(jié)果

750bP660bP圖1一4菌落直接PCR鑒定結(jié)果Fig.l一4DireetPCRResultofexPressionveetorPLNCXHLFwithFI/RIsystem1:DL200OMarker2-5:表達(dá)載體pLNCXHLF1:DL2000MarkerZ一5:exPressionveetornallledPLNCXHLF1.2.4pLNcxHLF酶切鑒定結(jié)果圖1一5表達(dá)載體pLNcxHLF在BamHIandHindln內(nèi)切酶的作用下，被切成兩段分別為3kb和6kb的帶，見圖1一5。表達(dá)載體pLNCXHLF結(jié)構(gòu)見圖1一1。14

IO0bP744bP圖1一3FZ瓜ZPCR系統(tǒng)表達(dá)載體pLNCXHLF鑒定結(jié)果Fig，l一3ResultofexPressionveetorPLNCXHLFbyusingFZ/RZPCRsysteml:DLZOooMarkerZ一5:表達(dá)載體pLNCxHLF1:DLZOOOMarkerZ一5:exPressionveetornamedPLNCXHLF1.2.3菌落Fl瓜1系統(tǒng)直接PCR鑒定結(jié)果2345200ObP100750bP660bP圖1一4菌落直接PCR鑒定結(jié)果Fig.l一4DireetPCRResultofexPressionveetorPLNCXHLFwithFI/RIsystem1:DL200OMarker2-5:表達(dá)載體pLNCXHLF1:DL2000MarkerZ一5:exPressionveetornallledPLNCXHLF1.2.4pLNcxHLF酶切鑒定結(jié)果圖1一5表達(dá)載體pLNcxHLF在BamHIandHindln內(nèi)切酶的作用下，被切成兩段分別為3kb和6kb的帶，見圖1一5。表達(dá)載體pLNCXHLF結(jié)構(gòu)見圖1一1。14

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3229476