本文關(guān)鍵詞：Cj致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)病模型—百日咳毒素劑量范圍及灌喂頻率的探索性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分:0.1μg~20μg范圍的百日咳毒素與Cj致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)纖維病變率沒有劑量依賴關(guān)系目的:百日咳毒素可促進(jìn)空腸彎曲菌致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)病變模型的形成,但是劑量范圍尚不清楚,觀察0.1μg~20μg的百日咳毒素對(duì)空腸彎曲菌(Campylobacter jejune,Cj)致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)纖維病變率的影響。方法:1制備菌懸液:從空腸彎曲菌菌株庫中選取lulei株作為實(shí)驗(yàn)菌株,用哥倫比亞血培養(yǎng)基于42℃,10%CO2、5%O2、85%N2條件培養(yǎng)空腸彎曲菌。純化菌種,制備3×108cfu/ml菌懸液,準(zhǔn)備為Hartley豚鼠灌胃。2制備百日咳毒素注射液:在百日咳毒素粉劑(50μg)中加入50μl蒸餾水,備以配制不同濃度的PT注射液,準(zhǔn)備為Hartley豚鼠腹腔注射。3實(shí)驗(yàn)分組:將12只SPF級(jí)4周齡Hartley豚鼠隨機(jī)分為5組實(shí)驗(yàn)組和1組對(duì)照組,每組2只,實(shí)驗(yàn)組分為:A組:0.1μg百日咳毒素+3×108cfu/ml Cj菌懸液;B組:1μg百日咳毒素+3×108cfu/ml Cj菌懸液;C組:2μg百日咳毒素+3×108cfu/ml Cj菌懸液;D組:10μg百日咳毒素+3×108cfu/ml Cj菌懸液;E組:20μg百日咳毒素+3×108cfu/ml Cj菌懸液。對(duì)照組F組為空白對(duì)照組。4攻毒方案:攻毒前Hartley豚鼠禁食15h,禁水3h,實(shí)驗(yàn)組各組豚鼠用相應(yīng)劑量的PT注射液腹腔注射,次日各實(shí)驗(yàn)組豚鼠給予空腸彎曲菌lulei株3×108cfu/ml菌懸液口服灌喂,2ml/只。攻毒結(jié)束后半小時(shí)給食水。各實(shí)驗(yàn)組均攻毒一次。5實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的臨床癥狀觀察及解剖取材:自灌喂當(dāng)日起每日觀察豚鼠的肢體活動(dòng)、精神狀況、飲食、皮毛、糞便等情況。臨床癥狀參考Hartley豚鼠EAN模型的癱瘓?jiān)u分標(biāo)準(zhǔn)[1]:將癱瘓程度分為0~5級(jí),0級(jí):無異常;1級(jí):兩后肢腳趾輕微拖拽地面;2級(jí):兩后肢腳趾較明顯拖地,但未累及其他部位;3級(jí):兩后肢顯著拖地,常見兩后肢偏向同一側(cè);4級(jí):兩后肢完全癱瘓;5級(jí):四肢肢體活動(dòng)均受累,甚至出現(xiàn)呼吸抑制。于攻毒結(jié)束后4周取材,每組取一只豚鼠深度麻醉后活體取材,取左側(cè)坐骨神經(jīng)浸于4%的多聚甲醛中固定后鋨酸染色,右側(cè)坐骨神經(jīng)做冰凍切片后進(jìn)行HE染色和Gomori染色。每組的另一只豚鼠經(jīng)4%的多聚甲醛灌注后取材,取雙側(cè)坐骨神經(jīng)保存于4%的多聚甲醛中用于鋨酸染色。6觀察神經(jīng)病理變化及統(tǒng)計(jì)分析:光學(xué)顯微鏡下觀察坐骨神經(jīng)鋨酸染色、HE染色及Gomori染色的病理結(jié)果。體式顯微鏡下每只豚鼠隨機(jī)分離100根神經(jīng)單根纖維,計(jì)算周圍神經(jīng)纖維病變率(周圍神經(jīng)纖維病變率=病變神經(jīng)單根纖維數(shù)/100×100%)。采用χ2分割法分析各組之間周圍神經(jīng)纖維病變率有無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,采用χ2檢驗(yàn),分析每組豚鼠活體取材和灌注后取材周圍神經(jīng)纖維病變率,進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析。結(jié)果:1豚鼠的臨床癥狀:對(duì)照組豚鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中精神、飲食均可,且未出現(xiàn)肢體活動(dòng)障礙現(xiàn)象及皮毛較臟等異常現(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)組豚鼠于注射百日咳毒素后當(dāng)天精神、食欲稍差,其中D組8號(hào)豚鼠注射PT后右下肢運(yùn)動(dòng)能力明顯減退,不能站立,根據(jù)Hartley豚鼠EAN模型評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),評(píng)分2級(jí),放回籠中觀察5min,運(yùn)動(dòng)能力明顯好轉(zhuǎn),可站立,觀察30min,運(yùn)動(dòng)能力恢復(fù)正常,評(píng)分0級(jí)。次日,實(shí)驗(yàn)組豚鼠精神、食欲恢復(fù)正常。實(shí)驗(yàn)組豚鼠于注射百日咳毒素后第二天灌喂空腸彎曲菌,E組6號(hào)豚鼠自灌喂結(jié)束后17天腹部出現(xiàn)皮毛較臟現(xiàn)象。其余實(shí)驗(yàn)組豚鼠未出現(xiàn)肢體活動(dòng)障礙、皮毛較臟等異�，F(xiàn)象;2神經(jīng)病理觀察:2.1鋨酸染色觀察:實(shí)驗(yàn)組豚鼠坐骨神經(jīng)出現(xiàn)髓鞘脫失、斷裂、聚集成塊狀,部分軸索被壓迫,軸索粗細(xì)不等,愞飛氏結(jié)處板層疏松,結(jié)旁區(qū)皺縮呈城墻樣改變,愞飛氏結(jié)處蟲蝕樣改變,愞飛氏結(jié)增寬。對(duì)照組豚鼠坐骨神經(jīng)愞飛氏結(jié)無增寬,髓鞘、軸索光滑。2.2實(shí)驗(yàn)組HE染色觀察:軸索粗細(xì)不等,部分軸索斷裂,髓鞘呈大小不一、程度不等的空泡樣變。2.3實(shí)驗(yàn)組Gomori染色觀察:部分軸索斷裂、粗細(xì)不等,髓鞘呈不同程度、不同部位的空泡樣變;3鋨酸染色后各組周圍神經(jīng)病變率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果:各組Hartley豚鼠周圍神經(jīng)纖維病變率如下:A(0.1μg)組為12.5%,B(1μg)組為22.5%,C(2μg)組為23%,D(10μg)組為19.5%,E(20μg)組為22%,F(0μg)組為2.5%。采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用χ2分割法對(duì)各組之間的周圍神經(jīng)纖維病變數(shù)進(jìn)行雙側(cè)性顯著檢驗(yàn),校正檢驗(yàn)水準(zhǔn),α的校正值為0.0033,得出F組與A~E各組之間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,A~E各組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。采用χ2檢驗(yàn)對(duì)各組組內(nèi)豚鼠坐骨神經(jīng)纖維的病變數(shù)進(jìn)行雙側(cè)性顯著檢驗(yàn),檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05,得出各組活體取材和灌注后取材周圍神經(jīng)纖維病變率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1空腸彎曲菌聯(lián)合百日咳毒素可以導(dǎo)致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)的損傷。2 0.1μg~20μg范圍的百日咳毒素用量與Hartley豚鼠的周圍神經(jīng)纖維病變率沒有劑量依賴關(guān)系。第二部分:灌喂頻率的改變對(duì)Cj致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)病模型的影響觀察目的:探索空腸彎曲菌致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)病模型的最佳灌喂頻率,改良造模方案。方法:1制備菌懸液:從空腸彎曲菌菌株庫中選取lulei株作為實(shí)驗(yàn)菌株,用哥倫比亞血培養(yǎng)基于42℃,10%CO2、5%O2、85%N2條件培養(yǎng)空腸彎曲菌。純化菌種,制備3×108cfu/ml菌懸液。2實(shí)驗(yàn)方法:將32只SPF級(jí)4周齡Hartley豚鼠隨機(jī)分為2組實(shí)驗(yàn)組和1組對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組每組12只,對(duì)照組8只。實(shí)驗(yàn)組分為:A組:每隔2天攻毒一次,連續(xù)攻毒7次,攻毒后每5天解剖3只。B組:每隔1天攻毒一次,連續(xù)攻毒10次,攻毒后每5天解剖3只。攻毒方法為空腸彎曲菌lulei株3×108cfu/ml菌懸液口服灌喂豚鼠,2ml/只,灌喂前Hartley豚鼠禁食15小時(shí),禁水3小時(shí),灌喂后半小時(shí)給食水。對(duì)照組C組為空白對(duì)照,分批次與實(shí)驗(yàn)組同期解剖,每批解剖2只。3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物臨床癥狀、病理觀察及統(tǒng)計(jì)分析:自灌喂當(dāng)日起每日觀察豚鼠的肢體活動(dòng)、飲食、體重、皮毛、大便的情況(豚鼠的癱瘓?jiān)u分評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)參考第一部分中文摘要方法5)。于攻毒后按時(shí)間點(diǎn)解剖取材,取坐骨神經(jīng)進(jìn)行鋨酸染色,每只豚鼠隨機(jī)分離100根神經(jīng)單絲,觀察豚鼠的周圍神經(jīng)纖維病變情況,統(tǒng)計(jì)每組豚鼠周圍神經(jīng)纖維病變數(shù),計(jì)算周圍神經(jīng)纖維病變率(周圍神經(jīng)纖維病變率=病變神經(jīng)單根纖維數(shù)/100×100%)。采用χ2分割法對(duì)各組之間以及各組組內(nèi)不同解剖批次之間的周圍神經(jīng)纖維病變率進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)差異分析。結(jié)果:1豚鼠的臨床癥狀:對(duì)照組豚鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中精神、飲食均可,且未出現(xiàn)肢體活動(dòng)障礙現(xiàn)象及脫毛、皮毛較臟等異�，F(xiàn)象。實(shí)驗(yàn)組豚鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中精神、飲食均可,肢體活動(dòng)自如,其中B組16號(hào)、79號(hào)豚鼠于末次攻毒后5天出現(xiàn)脫毛現(xiàn)象,79號(hào)豚鼠于攻毒結(jié)束后18天皮毛恢復(fù)正常,16號(hào)豚鼠至解剖日皮毛未恢復(fù)正常;2神經(jīng)病理觀察:2.1鋨酸染色:實(shí)驗(yàn)組豚鼠坐骨神經(jīng)纖維出現(xiàn)髓鞘斷裂聚集成塊狀,部分軸索被壓迫,愞飛氏結(jié)結(jié)旁區(qū)皺縮呈城墻樣改變,愞飛氏結(jié)處蟲蝕樣改變。對(duì)照組豚鼠坐骨神經(jīng)纖維愞飛氏結(jié)無增寬,髓鞘、軸索光滑。2.2鋨酸染色后各組周圍神經(jīng)病變率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果:A組為24.17%,B組為25.83%,C組為3.125%。各組組內(nèi)四個(gè)解剖批次的周圍神經(jīng)病變率的統(tǒng)計(jì)結(jié)果:A1為19.33%,A2為25.67%,A3為26.67%,A4為25.00%,B1為21.33%,B2為25.00%,B3為26.67%,B4為30.33%,C1為3.5%,C2為2.5%,C3為3.0%,C4為3.5%。使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用χ2分割法分別對(duì)A、B、C三組組間的神經(jīng)病變情況進(jìn)行雙側(cè)性顯著檢驗(yàn),α的校正值為0.0167,得出A、B組均與C組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,A組和B組之間的無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;對(duì)每組組內(nèi)各解剖批次的神經(jīng)纖維病變情況進(jìn)行雙側(cè)性顯著檢驗(yàn),α的校正值為0.0083,得出A組、B組、C組各解剖批次之間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論:1消化道接觸空腸彎曲菌的頻率由每隔2天一次,持續(xù)7次增加到每隔1天一次,持續(xù)10次不能提高豚鼠的周圍神經(jīng)發(fā)病率。2自攻毒結(jié)束后20天內(nèi)四個(gè)解剖時(shí)間點(diǎn)的豚鼠周圍神經(jīng)纖維發(fā)病率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3機(jī)體的免疫狀態(tài)相對(duì)于空腸彎曲菌的接觸頻率對(duì)機(jī)體發(fā)病情況的影響更為重要。
【關(guān)鍵詞】：百日咳毒素 空腸彎曲菌 Hartley豚鼠 周圍神經(jīng)病 劑量效應(yīng)關(guān)系 灌喂頻率 空腸彎曲菌 Hartley豚鼠 周圍神經(jīng)病 動(dòng)物模型
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R745;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-10
• 英文摘要10-15
• 英文縮寫15-17
• 引言17-18
• 第一部分 0.1μg～20μg范圍的百日咳毒素與Cj致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)纖維病變率沒有劑量依賴關(guān)系18-50
• 前言18-19
• 材料與方法19-29
• 結(jié)果29-32
• 附圖32-38
• 附表38-40
• 討論40-45
• 小結(jié)45-46
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 第二部分 灌喂頻率的改變對(duì)Cj致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)病模型的影響觀察50-66
• 前言50-51
• 材料與方法51-54
• 結(jié)果54-56
• 附圖56-59
• 附表59-61
• 討論61-63
• 小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-66
• 結(jié)論66-67
• 綜述 百日咳毒素在疾病動(dòng)物模型中的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用67-76
• 參考文獻(xiàn)72-76
• 致謝76-77
• 個(gè)人簡歷77

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 徐飛;邢叢叢;陳揚(yáng);李震中;白欣立;;吉蘭-巴雷綜合征空腸彎曲菌感染誘導(dǎo)巴馬小型豬致周圍神經(jīng)病動(dòng)物模型的建立[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2012年02期

2 鐘玉霞;葛睿;吳麗媛;戴鈺;張學(xué)軍;;CD24分子調(diào)節(jié)百日咳毒素誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2011年05期

3 楊瑜;朱為;;百日咳毒素在疫苗中的研究現(xiàn)狀及應(yīng)用[J];國際生物制品學(xué)雜志;2007年04期

  本文關(guān)鍵詞：Cj致Hartley豚鼠周圍神經(jīng)病模型—百日咳毒素劑量范圍及灌喂頻率的探索性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：322256