本文關(guān)鍵詞：細胞自噬調(diào)節(jié)造血干細胞靜息機制的初步探討，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：血液細胞來源于骨髓中極少數(shù)長期造血干細胞(又稱為多潛能造血干細胞)(long-term hematopoietic stem cells,LT-HSCs)。在骨髓中LT-HSC分化為短期造血干細胞(short-term HSCs,ST-HSCs),ST-HSCs進一步分化為不同的造血前體細胞,最終分化為成熟血細胞。作為血細胞的“種子”,大部分LT-HSCs分布在封閉的骨髓組織,處于不增殖,不分化,不凋亡的靜息狀態(tài)(quiescence),而干擾LT-HSCs的靜息狀態(tài),會引起造血干細胞的異常擴增,引起骨髓造血干細胞的衰竭(exhaustion)或者轉(zhuǎn)化為白血病干細胞,導致造血功能障礙。因此,維持LT-HSCs的靜息狀態(tài),對維系骨髓的終生造血能力和應(yīng)激反應(yīng)能力有重要作用。造血干細胞處于低氧的骨髓微環(huán)境(niche)。在低氧或者營養(yǎng)缺乏的條件下,細胞自噬(autophagy)通過分解衰老的細胞器和變性的生物大分子為細胞的生存提供物質(zhì)和能量支持。細胞自噬是真核生物中進化保守的對細胞內(nèi)物質(zhì)進行周轉(zhuǎn)的重要過程。越來越多的研究表明,細胞自噬參與調(diào)節(jié)胚胎干細胞的增殖和分化、胚胎的生長和發(fā)育。但是,因為缺乏有效的動物和細胞模型,有關(guān)細胞自噬是否以及如何調(diào)節(jié)造血干細胞靜息狀態(tài)的機制還不清楚。在前期研究的基礎(chǔ)上,本文以造血干細胞系EML為模型,利用細胞生物學、分子生物學和遺傳學的技術(shù)方法,探討細胞自噬和造血干細胞狀態(tài)的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)細胞自噬參與調(diào)節(jié)造血干細胞的靜息狀態(tài)的維持以及靜息和增殖狀態(tài)的轉(zhuǎn)換。本文的主要結(jié)果包括:1.在EML細胞系,成功分離兩個細胞亞群(LSKCD34-(CD34-)和LSKCD34+(CD34+))。證實CD34-細胞處于靜息狀態(tài),CD34+細胞處于增殖狀態(tài),并且兩群細胞相互轉(zhuǎn)換。2.基因表達譜分析發(fā)現(xiàn),CD34-和CD34+兩群細胞中細胞自噬相關(guān)基因及其上游轉(zhuǎn)錄因子的表達存在顯著差異,自噬相關(guān)基因的表達在CD34-細胞顯著高于比CD34+細胞。3.細胞自噬激活劑rapamycin抑制CD34-細胞轉(zhuǎn)化為CD34+細胞,相反,wnt信號通路重要轉(zhuǎn)錄因子TCF7抑制細胞自噬,促進處于靜息狀態(tài)CD34-細胞轉(zhuǎn)化為CD34+細胞。
【關(guān)鍵詞】：造血干細胞 細胞自噬 靜息 增殖
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R331.2
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 英文摘要5-7
• 中文摘要7-8
• 1 前言8-9
• 2 材料和方法9-27
• 2.1 細胞培養(yǎng)9-11
• 2.2 Western Blot11-17
• 2.3 Realtime PCR17-20
• 2.4 流式細胞分析、分選20-22
• 2.5 細胞周期和增殖分析22-23
• 2.6 基因表達分析23-24
• 2.7 慢病毒感染EML細胞24-25
• 2.8 免疫熒光檢測25-27
• 3 結(jié)果27-36
• 4 討論36-38
• 全文總結(jié)38-39
• 參考文獻39-42
• 文獻綜述 細胞自噬與造血干細胞的功能調(diào)節(jié)42-52
• 參考文獻48-52
• 攻讀碩士學位期間撰寫發(fā)表的文章52-53
• 致謝53

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本文編號：321425