本文關鍵詞：8-羥基脫氧鳥嘌呤的選擇性化學修飾及其納米孔單分子檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：8-羥基脫氧鳥嘌呤(8-oxo G,OG)是由活性氧引發(fā)的最常見的DNA氧化損傷之一,因其體內生成量相對較高、存在普遍、穩(wěn)定、能用靈敏度較高的分析方法檢測等特點,被視為DNA氧化損傷的生物標志物。研究發(fā)現(xiàn),人體中OG含量的升高會誘發(fā)基因突變和提高致癌的風險,因此,OG含量的檢測對于疾病的早期檢測和監(jiān)控有著重要的意義。本論文擬將化學修飾方法與納米孔單分子檢測技術結合,使用化學修飾方法,在單鏈DNA中的OG位點修飾上主客體復合物,繼而利用納米孔單分子技術,記錄修飾雜化體穿越α-溶血毒素納米孔的電信號,通過特征信號的類型和信號頻率,定性和定量檢測DNA氧化損傷。論文主要內容如下:(1)篩選最優(yōu)修飾路線。以高選擇性、高修飾率和高度特征信號為準則,確定最終修飾路線。修飾路線分兩步完成:首先OG在Na2Ir Cl6催化下與1,12-二氨基十二烷反應,然后與金剛烷衍生物Ad-C3-NHS發(fā)生酰胺反應,兩步反應均表現(xiàn)較高的修飾率,修飾產物與葫蘆脲[7]共孵育后形成雜化體DNA-Ad?CB[7],利用納米孔單分子技術進行檢測。(2)納米孔單分子實驗得到的特征信號主要有兩部分組成:電流阻滯接近100%、長阻滯時間的Level 1和電流來回振蕩的Level 2-2’,部分信號還有Level M。該特征信號的產生與?-溶血毒素蛋白的三個氨基酸有關。(3)定性和定量檢測OG。通過與普通堿基A、T、G、C的對照組實驗,發(fā)現(xiàn)只有OG發(fā)生了化學反應,而且與修飾后使用納米孔單分子技術檢測到的特征信號形成對應關系,因此該方法可用于OG的定性檢測。使用不同濃度的標準樣本建立濃度與特征信號頻率的標準曲線,發(fā)現(xiàn)模擬實際樣品的信號頻率與之吻合度良好。我們首次使用納米孔單通道技術得到DNA氧化損傷的定量信息,可檢測的OG最低含量為5%。(4)研究升溫對特征信號的影響。DNA鏈長會增加Level 1的阻滯時間,通過升溫的手段縮短Level 1的阻滯時間,完成長鏈DNA的OG氧化水平的檢測,并嘗試使用升溫對DNA鏈含雙OG氧化水平的檢測。本論文中,我們利用主客體相互作用構建了新穎的納米孔傳感平臺,完成DNA的OG氧化水平的定性和定量檢測,該方法還有望拓展到其它修飾堿基,具有廣泛的應用前景。
【關鍵詞】：8-羥基脫氧鳥嘌呤 DNA氧化損傷 納米孔單通道 ?-溶血毒素
【學位授予單位】：中國礦業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 致謝4-6
• 摘要6-7
• Abstract7-17
• 1 緒論17-32
• 1.18-羥基脫氧鳥嘌呤及其生物學意義17-18
• 1.2 8-羥基脫氧鳥嘌呤檢測方法概述18-20
• 1.3 納米孔單通道檢測技術20-29
• 1.4 納米孔單分子檢測技術應用于OG檢測29-30
• 1.5 本論文主要研究內容30-32
• 2 實驗部分32-41
• 2.1 實驗試劑與主要儀器設備32-34
• 2.2 實驗內容34-41
• 3 OG化學修飾方法優(yōu)化41-53
• 3.1 一端氨基和兩端氨基對OG反應產率的影響43-49
• 3.2 PEG和烷基鏈對OG反應產率的影響49
• 3.3 修飾側鏈長度對特征信號的影響49-51
• 3.4 本章小結51-53
• 4 雜化體DNA7-ADìCB[7]穿越納米孔時產生的特征電流信號研究53-59
• 4.1 主客體相互作用對特征信號的影響53-55
• 4.2 雜化體DNA7-AdìCB[7]特征電信號分析55-58
• 4.3 本章小結58-59
• 5 OG的定性和定量檢測59-66
• 5.1 OG的定性檢測59-62
• 5.2 OG的定量檢測62-64
• 5.3 本章小結64-66
• 6 有機化合物的表征66-71
• 7 結論和創(chuàng)新點71-73
• 7.1 結論71-72
• 7.2 創(chuàng)新點72-73
• 參考文獻73-80
• 作者簡歷80-82
• 學位論文數(shù)據(jù)集82

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張春萍;;a溶血素納米孔的研究進展和應用[J];基因組學與應用生物學;2014年05期

2 Siqi Zhang;Ting Sun;Erkang Wang;Jiahai Wang;;Investigation of self-assembled protein dimers through an artificial ion channel for DNA sensing[J];Chinese Science Bulletin;2014年35期

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 應佚倫;基于生物納米通道的單分子弱相互作用研究[D];華東理工大學;2014年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 楊純;納米孔單通道記錄在金屬離子檢測中的應用[D];長沙理工大學;2013年

2 李云云;石英毛細管上納米孔粒子通過事件檢測方法初步研究[D];東北大學;2012年

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本文編號：321188