本文關(guān)鍵詞：不同人源細(xì)胞對人細(xì)小病毒B19敏感性的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：人細(xì)小病毒B19(Human Parvovirus B19,簡稱B19病毒)是細(xì)小病毒科紅病毒屬的代表性病毒。B19病毒主要在公共場所通過呼吸道進(jìn)行傳播,患病人群具有廣泛性,不同國家地區(qū)及種族的成人和兒童都有患病的報(bào)道。根據(jù)近年研究顯示,B19病毒在臨床上的疾病感染譜較為寬泛,并且胎肝、腎臟、胎盤血管內(nèi)皮細(xì)胞等病灶都能在電鏡下觀察到B19病毒顆粒。B19病毒也能通過血液及血液代用品、母嬰垂直感染等渠道進(jìn)行傳播。正因如此,B19病毒在近年受到了越來越多關(guān)注和研究。B19病毒主要是與細(xì)胞表面的紅細(xì)胞糖苷脂(Gb4)結(jié)合,紅細(xì)胞糖苷脂主要存在于骨髓的紅系祖細(xì)胞表面。雖然B19病毒在臨床上的疾病感染譜較為寬泛,但是依然沒有找到能有效感染B19病毒的細(xì)胞系�，F(xiàn)階段還不能離體分離培養(yǎng)B19病毒,高載量的病毒還依賴于病料血漿/清等來源。目的:以半允許細(xì)胞UT-7/EPO作為參照,鑒定不同人源細(xì)胞系K562、HL-60、THP-1、Jukat、Huh715細(xì)胞對B19病毒的敏感性。方法:首先得到并培養(yǎng)了B19病毒的半允許細(xì)胞系UT-7/EPO細(xì)胞,調(diào)整了細(xì)胞狀態(tài)、摸索了最適的培養(yǎng)條件。篩選了病毒載量大于107copies/mL的病料血漿并進(jìn)行分型,選取了流行性最廣泛的Ⅰ型病毒作為感染源。然后用病料血漿感染不同的人源細(xì)胞,并在2h、8h、16h、24h、32h、40h、2d、3d、4d、5d、6d分別取樣提取細(xì)胞上清及細(xì)胞中的DNA、細(xì)胞中的RNA(反轉(zhuǎn)為cDNA)進(jìn)行定量PCR檢測。最后根據(jù)定量PCR檢測結(jié)果,對敏感性與半允許細(xì)胞UT-7/EPO細(xì)胞相當(dāng)或是更好的細(xì)胞進(jìn)行Western Blot及免疫熒光(IF)的檢測。結(jié)果:通過感染細(xì)胞上清的檢測,證明B19病毒能夠吸附在半允許細(xì)胞UT-7/EPO的表面,其他的細(xì)胞的變化趨勢不如UT-7/EPO細(xì)胞明顯;細(xì)胞中DNA及RNA的檢測表明,UT-7/EPO細(xì)胞對B19病毒有一定的敏感性但轉(zhuǎn)錄復(fù)制并不活躍,B19病毒未能進(jìn)入到K562、HL-60、THP-1、Jukat、Huh715細(xì)胞;對UT-7/EPO細(xì)胞進(jìn)行Western Blot及免疫熒光(IF)的檢測顯示,能產(chǎn)生一定量的蛋白外殼,但是并不能包裝形成相應(yīng)量的病毒子粒。結(jié)論:本研究明確了B19病毒半允許細(xì)胞UT-7/EPO感染B19病毒的體系以及該細(xì)胞感染效率和產(chǎn)生子代病毒子粒的情況。其他5種人源的白血病細(xì)胞及肝癌細(xì)胞對B19病毒的敏感性遠(yuǎn)不及UT-7/EPO細(xì)胞,說明B19病毒即使在人體內(nèi)感染效率很高、有很寬泛的疾病感染譜,但是在離體繁殖的過程中受到很多因素的限制。探索并尋找對B19病毒的敏感細(xì)胞系將對研究B19病毒的在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制周期、細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、RNA轉(zhuǎn)錄圖譜等的作用機(jī)制有很重要的意義。
【關(guān)鍵詞】：人細(xì)小病毒B19 人源細(xì)胞 敏感性
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R373
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 前言8-9
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述9-13
• 第一章 引言9
• 第二章 B19病毒的生物學(xué)特性及流行病學(xué)9-10
• 第三章 與B19病毒相關(guān)的疾病及檢測10-11
• 第四章 B19病毒的體外培養(yǎng)及血液制品安全11-13
• 第二篇 研究內(nèi)容13-42
• 第一章 半允許細(xì)胞UT-7/EPO的復(fù)壯13-22
• 1 材料和方法13-15
• 2 結(jié)果15-20
• 3 討論20
• 4 小結(jié)20-22
• 第二章 不同人源細(xì)胞對人細(xì)小病毒B19敏感性的鑒定22-42
• 1 材料和方法22-31
• 2 結(jié)果31-39
• 3 討論39-41
• 4 小結(jié)41-42
• 結(jié)論42-43
• 參考文獻(xiàn)43-48
• 作者簡介48-49
• 致謝49

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 成勝權(quán),張國成,鄭英文;人細(xì)小病毒B19感染與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)性[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2001年13期

  本文關(guān)鍵詞：不同人源細(xì)胞對人細(xì)小病毒B19敏感性的鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：320216