目的探討肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞自噬體與肺炎克雷伯菌相互作用的分子機(jī)制。方法建立體外肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae）感染A549細(xì)胞模型,分為感染組（Pneu）、自噬抑制組（Pneu+3-MA）、自噬誘導(dǎo)組（Pneu+rapa）、陰性對照組（ctrl）,每組3個樣本;通過免疫熒光染色與western-blot實(shí)驗(yàn)檢測肺炎克雷伯菌不同時間點(diǎn)及不同濃度感染后細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3Ⅱ的表達(dá)變化及分布情況;進(jìn)一步采用自噬抑制劑3-Methyladenine （3-MA）與激動劑雷帕霉素（Rapamycin）干預(yù)細(xì)胞,觀察K.pneumoniae感染A549細(xì)胞后自噬水平的變化。結(jié)果與未感染肺炎克雷伯菌的對照組相比,共聚焦顯微鏡觀察感染組細(xì)胞LC3自噬體發(fā)生明顯改變（P<0.05）,western-blot檢測感染組細(xì)胞LC3Ⅱ蛋白表達(dá)上升（P<0.05）,且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ升高（P<0.05）,表明肺炎克雷伯菌能夠促進(jìn)細(xì)胞自噬,隨著細(xì)菌感染細(xì)胞比例（MOI）的增大,細(xì)胞自噬隨之增多,隨著時間的延長,肺炎克雷伯菌對細(xì)胞的入侵能力減弱（自噬增加）,LC3Ⅱ蛋白的表達(dá)逐漸增... 

【文章來源】：中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2019,29(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株與細(xì)胞株
    1.2 試劑與儀器
    1.3 方法
        1.3.1 細(xì)菌計(jì)數(shù)
        1.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.3.3 細(xì)胞感染模型建立
        1.3.4 共聚焦顯微鏡檢測LC3自噬點(diǎn)變化
        1.3.5 western-blot檢測自噬蛋白LC3Ⅱ表達(dá)水平
        1.3.6 自噬的誘導(dǎo)和抑制
    1.4 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié) 果
    2.1 肺炎克雷伯菌感染后細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
    2.2 共聚焦顯微鏡觀察肺炎克雷伯菌感染A549細(xì)胞LC3自噬點(diǎn)變化
    2.3 western-blot檢測自噬蛋白LC3Ⅱ表達(dá)量
    2.4 自噬相關(guān)激動劑及抑制劑處理后對K.pneumoniae感染A549細(xì)胞自噬水平的影響
        2.4.1 免疫熒光結(jié)果
        2.4.2 western-blot檢測結(jié)果
3 討 論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]寧夏地區(qū)某醫(yī)院耐碳青霉烯類腸桿菌科細(xì)菌臨床分布及耐藥基因的分析[J]. 劉香花,師志云,李剛,賈偉.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2018(05)
[2]燒傷科患者腸桿菌科細(xì)菌耐藥性與基因型分布[J]. 師志云,趙慧錚,李彩云,李剛,陶佳,李莎莎,姚瑤,賈偉.  中華醫(yī)院感染學(xué)雜志. 2016(12)
[3]7315株腸桿菌科細(xì)菌的臨床分布與耐藥性分析[J]. 李剛,趙慧錚,賈偉,趙梅,周曉燕,馬紅,王琳琳,李莎莎,董輝,師志云.  國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2015(06)
[4]2012年中國CHINET無菌體液中分離的細(xì)菌構(gòu)成和耐藥性監(jiān)測[J]. 朱任媛,張小江,徐英春,俞云松,林潔,汪復(fù),朱德妹,倪語星,孫景勇,孫自鏞,陳中舉,胡云建,艾效曼,張泓,孔菁,胡志東,李全,王傳清,王愛敏,魏蓮花,吳玲,卓超,蘇丹虹,張朝霞,季萍,徐元宏,沈繼錄,單斌,杜艷,褚云卓.  中國感染與化療雜志. 2014(06)
[5]視黃酸對細(xì)胞因子誘導(dǎo)的人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞分泌C3及B因子的影響[J]. 趙玉霞,李光,于潤江.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2005(04)



本文編號：3181513