Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase1 （HPRT1）基因突變會(huì)導(dǎo)致次黃嘌呤和鳥(niǎo)嘌呤代謝異常,嚴(yán)重的代謝障礙被稱為L(zhǎng)esch-Nyhan綜合征,表現(xiàn)為智力低下,行為上出現(xiàn)強(qiáng)迫性自我毀傷,并伴隨痛風(fēng)或腎結(jié)石等癥狀。HPRT1基因具有多種突變模式,近年來(lái)對(duì)其突變譜的研究表明該基因具有一些"突變熱點(diǎn)"。本研究選取了導(dǎo)致翻譯提前終止的熱點(diǎn)突變c.508C>T突變和c.151C>T突變,在HEK293T和HeLa細(xì)胞中,以單鏈寡核苷酸（single-stranded oligo-deoxyribonucleotides, ssODN）作為同源重組模板,利用CRISPR/Cas9技術(shù)構(gòu)建了這兩種突變的單克隆細(xì)胞株,發(fā)生定點(diǎn)突變的效率分別為16.3%和10%。進(jìn)一步通過(guò)Westernblot檢測(cè)點(diǎn)突變的單克隆細(xì)胞的HPRT1蛋白表達(dá)水平,通過(guò)6-TG毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)點(diǎn)突變的單克隆細(xì)胞的次黃嘌呤/鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶活性,結(jié)果表明純合突變的單細(xì)胞克隆不能正常表達(dá)HPRT1蛋白,其次黃嘌呤/鳥(niǎo)嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶活性喪失;雜合突變的單細(xì)胞克隆... 

【文章來(lái)源】：遺傳. 2019,41(10)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：11 頁(yè)

【部分圖文】：

孔板時(shí)收集含有靶位點(diǎn)的識(shí)別序列

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]無(wú)義突變與“遺傳補(bǔ)償效應(yīng)”[J]. 馬志鵬,陳軍.  遺傳. 2019(05)



本文編號(hào)：3120110