本文關(guān)鍵詞：痤瘡丙酸桿菌對IPEC-J2細胞的免疫調(diào)節(jié)作用及作用機理，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的痤瘡丙酸桿菌作為最早定植于哺乳動物腸道中的微生物,它與腸道細胞的互作關(guān)系以及對腸道細胞的影響一直未被研究。本研究通過痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌與IPEC-J2細胞共培養(yǎng),觀察二者對IPEC-J2細胞的生物學(xué)影響,以探討?zhàn)畀彵釛U菌在腸道所起的作用。方法通過LDH法檢測痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌對IPEC-J2細胞膜的損傷率;在正置顯微鏡下觀察經(jīng)HE染色后的細胞形態(tài)變化;熒光定量PCR檢測緊密連接蛋白ZO-1和occludin m RNA的表達變化。采用MTS法和臺盼藍拒染法檢測與痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌共培養(yǎng)的IPEC-J2細胞活性與存活率;通過倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;通過熒光定量PCR法檢測3種TLR受體、5種促炎細胞因子和2種抗炎細胞因子基因表達的變化。結(jié)果痤瘡丙酸桿菌活菌對于IPEC-J2細胞膜具有一定的損傷性,并呈濃度依賴性;HE染色顯示高濃度的痤瘡丙酸桿菌活菌可致IPEC-J2細胞膜間隙變大;熒光定量PCR結(jié)果闡明痤瘡丙酸桿菌活菌可明顯下調(diào)ZO-1 m RNA的表達;對occludin m RNA的表達不產(chǎn)生影響。高濃度(1×108 CFU/m L)的痤瘡丙酸桿菌活菌能明顯降低IPEC-J2細胞的活性率和存活率,在倒置顯微鏡下可以觀察到細胞出現(xiàn)核皺縮,凸顯等現(xiàn)象。促炎因子與抗炎因子的熒光定量PCR結(jié)果顯示,痤瘡丙酸桿菌活菌能夠顯著上調(diào)促炎因子的表達,而對抗炎因子的表達沒有作用。在IPEC-J2細胞中未檢查到IL-10 m RNA的表達。TLR受體的熒光定量PCR檢測結(jié)果表明痤瘡丙酸桿菌活菌可以顯著上調(diào)TLR9 m RNA的表達,對TLR2和TLR4的基因表達無明顯影響。滅活的痤瘡丙酸桿菌在以上實驗結(jié)果中表現(xiàn)出的差異均無統(tǒng)計學(xué)上的意義。結(jié)論綜上所述,較高濃度的痤瘡丙酸桿菌活菌可能通過下調(diào)IPEC-J2細胞內(nèi)連接蛋白ZO-1 m RNA的表達而影響細胞中緊密連接功能;通過上調(diào)促炎因子的表達,而改變了促炎因子與抗炎因子在IPEC-J2細胞中的動態(tài)平衡。由于細胞膜間隙的增大和炎癥因子的表達失衡可能是誘發(fā)炎癥反應(yīng),導(dǎo)致細胞死亡的原因。這一系列的生物反應(yīng)可能是通過激活TLR9受體的表達而介導(dǎo)的,但具體機制仍不明確,還需進一步研究證實。
【關(guān)鍵詞】：痤瘡丙酸桿菌 IPEC-J2細胞 細胞因子 Toll樣受體 緊密連接
【學(xué)位授予單位】：廣東藥學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-16
• 第一部分 兩種菌種保藏方式的比較以及滅活溫度的探究16-21
• 1 材料16-17
• 1.1 細菌16
• 1.2 主要試劑和耗材16
• 1.3 主要儀器設(shè)備16-17
• 2 方法17-18
• 2.1 痤瘡丙酸桿菌的活化與培養(yǎng)17
• 2.2 痤瘡丙酸桿菌的保藏17-18
• 2.3 兩種保藏方法的比較18
• 2.4 熱滅活對痤瘡丙酸桿菌存活率的影響18
• 3 結(jié)果18-19
• 3.1 時間對兩種菌種保藏方法的影響18
• 3.2 不同滅活溫度對痤瘡丙酸桿菌存活率的影響18-19
• 4 討論19-21
• 第二部分 痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌對IPEC-J2細胞膜通透性及緊密連接的影響21-32
• 1 材料21-23
• 1.1 細菌與細胞21-22
• 1.2 主要試劑和耗材22
• 1.3 主要儀器設(shè)備22-23
• 2 方法23-27
• 2.1 痤瘡丙酸桿菌的培養(yǎng)及滅活23
• 2.2 顯微鏡鏡檢實驗23-24
• 2.3 LDH法檢測IPEC-J2細胞膜損傷率24-25
• 2.4 Real-Time PCR檢測目的基因的表達25-27
• 3 結(jié)果27-30
• 3.1 痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌對IPEC-J2細胞膜間隙的影響27-28
• 3.2 IPEC-J2細胞損傷率的變化28-29
• 3.3 occludin和ZO-1 的表達變化29-30
• 4 討論30-32
• 第三部分 痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌對IPEC-J2細胞生長及相關(guān)TLR樣受體和細胞因子的表達32-42
• 1 材料32-33
• 1.1 細菌與細胞32
• 1.2 主要試劑和耗材32-33
• 1.3 主要儀器設(shè)備33
• 2. 方法33-36
• 2.1 IPEC-J2細胞生長曲線的繪制33
• 2.2 顯微鏡鏡檢實驗33
• 2.3 細胞毒性實驗33-34
• 2.4 臺盼藍拒染實驗34
• 2.5 Real-Time PCR檢測目的基因的表達34-36
• 3 結(jié)果36-40
• 3.1 IPEC-J2細胞的生長曲線36
• 3.2 痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌對IPEC-J2細胞形態(tài)學(xué)改變36-37
• 3.3 痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌對IPEC-J2細胞活性率的影響37-38
• 3.4 痤瘡丙酸桿菌活菌和滅活菌對IPEC-J2細胞存活率的影響38
• 3.5 TLR樣受體和細胞因子表達變化38-40
• 4 討論40-42
• 4.1 促炎與抗炎因子動態(tài)失衡可能導(dǎo)致腸道炎癥的發(fā)生和細胞的壞死40-41
• 4.2 介導(dǎo)炎癥反應(yīng)的TLR受體41-42
• 全文總結(jié)42-43
• 展望43-44
• 參考文獻44-49
• 附錄一 碩士期間發(fā)表的論文49-50
• 附錄二 縮寫詞及中英文對照表50-51
• 致謝51

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 鄧宸璽;王自蕊;游金明;瞿明仁;葉亞玲;辛向榮;潘珂;;丙氨酰-谷氨酰胺二肽對仔豬小腸上皮細胞間緊密連接蛋白occludin定位與表達的影響[J];動物營養(yǎng)學(xué)報;2014年03期

2 徐昕怡;張s，

本文編號：305087