本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌ATCC27853對秀麗隱桿線蟲的毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究在不同培養(yǎng)基上生長的銅綠假單胞菌ATCC27853對秀麗隱桿線蟲生殖、壽命、生長發(fā)育和脂肪儲存的影響；觀察銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲藥物代謝酶通路上cyp35家族基因表達的影響；探討銅綠假單胞菌毒性分泌物對秀麗隱桿線蟲的致病機制和毒性作用。方法：建立銅綠假單胞菌-秀麗隱桿線蟲細菌感染模型,觀察各組培養(yǎng)基上秀麗隱桿線蟲壽命、產(chǎn)卵量、生長發(fā)育、脂肪儲存和運動情況；提取秀麗隱桿線蟲總RNA,通過實時熒光定量PCR分析銅綠假單胞菌分泌的毒性物質(zhì)對毒物-藥物代謝酶P450代謝通路上cyp35家族基因表達的調(diào)控作用；用油紅O對四組秀麗隱桿線蟲成蟲染色,觀察銅綠假單胞菌對體內(nèi)脂肪含量的影響；紫外分光光度計檢測四組不同液體培養(yǎng)的銅綠假單胞菌菌液中細菌密度、綠膿菌素和彈性蛋白酶及外分泌蛋白的濃度。結(jié)果：1.不同培養(yǎng)基生長的銅綠假單胞菌感染秀麗隱桿線蟲后,各實驗組平均生存時間和產(chǎn)卵量均低于對照組(P0.05),秀麗隱桿線蟲生長發(fā)育緩慢,運動的靈活性降低；2.秀麗隱桿線蟲感染銅綠假單胞菌后體內(nèi)的cyp35A1、cyp35A2、cyp35A5和cyp35C1等毒物-藥物代謝基因表達均上調(diào)；3.秀麗隱桿線蟲攝食銅綠假單胞菌后體內(nèi)脂肪的儲存減少；4.在LB培養(yǎng)基中生長的銅綠假單胞菌釋放的綠膿菌素濃度最高,而在TSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的銅綠假單胞菌釋放的彈性蛋白和外分泌蛋白濃度最高(P0.01)。結(jié)論：銅綠假單胞菌的增殖和毒力受生長環(huán)境影響,培養(yǎng)基不同,各種毒性分泌物比例不同,對秀麗隱桿線蟲的毒性也不同。同時秀麗隱桿線蟲體內(nèi)cyp35A1、cyp35A2、cyp35A5和cyp35C1等毒物-藥物代謝通路上相關(guān)基因表達上調(diào),說明cyp35家族基因?qū)︺~綠假單胞菌毒素代謝密切相關(guān)。彈性蛋白酶和綠膿菌素是銅綠假單胞菌導(dǎo)致線蟲死亡的主要毒力因子,彈性蛋白酶可能是TSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的銅綠假單胞菌引起秀麗隱桿線蟲快速致死的主要因素,而綠膿菌素是導(dǎo)致秀麗隱桿線蟲生長發(fā)育緩慢的最主要因素；QS密度感應(yīng)系統(tǒng)在對秀麗隱桿線蟲的感染中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：秀麗隱桿線蟲 銅綠假單胞菌 cyp35 綠膿菌素
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R378
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一部分 前言9-17
• 1.1 秀麗隱桿線蟲9-12
• 1.1.1 秀麗隱桿線蟲的發(fā)現(xiàn)與生物學特性9-11
• 1.1.2 秀麗隱桿線蟲-細菌感染模型的建立與應(yīng)用11-12
• 1.2 銅綠假單胞菌的致病性12-14
• 1.3 銅綠假單胞菌-秀麗隱桿線蟲細菌感染模型的研究進展14
• 1.4 秀麗隱桿線蟲細胞色素P450和cyp35家族基因的研究進展14-17
• 第二部分 實驗材料和方法17-25
• 2.1 實驗材料17
• 2.2 實驗試劑與藥品17
• 2.3 實驗設(shè)備和儀器17-18
• 2.4 實驗方法18-25
• 2.4.1 培養(yǎng)基配制18-19
• 2.4.2 銅綠假單胞菌和大腸桿菌(E.coli OP50)的培養(yǎng)、保存和復(fù)蘇19
• 2.4.3 秀麗隱桿線蟲的培養(yǎng)、保存和復(fù)蘇19-20
• 2.4.4 細菌感染模型的建立20
• 2.4.5 壽命的測定20
• 2.2.6 生殖率的測定20-21
• 2.4.7 運動能力的測定21
• 2.4.8 秀麗隱桿線蟲體長的觀察21
• 2.4.9 線蟲總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄21-23
• 2.4.10 秀麗隱桿線蟲脂肪染色23-24
• 2.4.11 不同液體培養(yǎng)液中銅綠假單胞菌的密度和毒性分泌物的測定24-25
• 第三部分 實驗結(jié)果25-33
• 3.1 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲壽命、生殖和運動能力的毒性作用25-29
• 3.1.1 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲壽命的影響25-27
• 3.1.2 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲生殖的抑制作用27-28
• 3.1.3 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲生長發(fā)育的抑制作用28
• 3.1.5 秀麗隱桿線蟲感染后銅綠假單胞菌后運動行為的變化28-29
• 3.2 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)cyp35家族基因中A1、A2、A5、C1表達的調(diào)控作用29-31
• 3.2.1 秀麗隱桿線蟲RNA的提取29
• 3.2.2 秀麗隱桿線蟲體內(nèi)cyp35家族基因中A1、A2、A5和C1的表達上調(diào)29-30
• 3.2.3 熒光定量PCR產(chǎn)物的驗證30-31
• 3.3 銅綠假單胞菌減少秀麗隱桿線蟲體內(nèi)的脂肪儲存量31
• 3.4 銅綠假單胞菌在不同培養(yǎng)基上的生長特點31-33
• 3.4.1 四組液體培養(yǎng)基中銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素的分泌特點31-32
• 3.4.2 不同固體培養(yǎng)基上銅綠假單胞菌菌苔特征32-33
• 第四部分 討論33-39
• 4.1 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲壽命、生長發(fā)育、生殖和運動能力的毒性作用33-35
• 4.1.1 銅綠假單胞菌對壽命的影響33-34
• 4.1.2 銅綠假單胞菌對生長發(fā)育和生殖的抑制作用34-35
• 4.1.3 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲運動能力的影響35
• 4.2 銅綠假單胞菌毒性分泌物對秀麗隱桿線蟲cyp35家族基因表達的調(diào)控作用35-37
• 4.4 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲體內(nèi)脂肪儲存的影響37-38
• 4.5 銅綠假單胞菌對秀麗隱桿線蟲的毒力38-39
• 結(jié)論39
• 研究展望39-40
• 參考文獻40-45
• 英文縮略詞匯45-46
• 在學期間的研究成果46-47
• 致謝47

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