發(fā)布時(shí)間：2017-04-14 02:10

  本文關(guān)鍵詞：銅綠假單胞菌ATCC27853對(duì)秀麗隱桿線蟲的毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：研究在不同培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的銅綠假單胞菌ATCC27853對(duì)秀麗隱桿線蟲生殖、壽命、生長(zhǎng)發(fā)育和脂肪儲(chǔ)存的影響；觀察銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲藥物代謝酶通路上cyp35家族基因表達(dá)的影響；探討銅綠假單胞菌毒性分泌物對(duì)秀麗隱桿線蟲的致病機(jī)制和毒性作用。方法：建立銅綠假單胞菌-秀麗隱桿線蟲細(xì)菌感染模型,觀察各組培養(yǎng)基上秀麗隱桿線蟲壽命、產(chǎn)卵量、生長(zhǎng)發(fā)育、脂肪儲(chǔ)存和運(yùn)動(dòng)情況；提取秀麗隱桿線蟲總RNA,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析銅綠假單胞菌分泌的毒性物質(zhì)對(duì)毒物-藥物代謝酶P450代謝通路上cyp35家族基因表達(dá)的調(diào)控作用；用油紅O對(duì)四組秀麗隱桿線蟲成蟲染色,觀察銅綠假單胞菌對(duì)體內(nèi)脂肪含量的影響；紫外分光光度計(jì)檢測(cè)四組不同液體培養(yǎng)的銅綠假單胞菌菌液中細(xì)菌密度、綠膿菌素和彈性蛋白酶及外分泌蛋白的濃度。結(jié)果：1.不同培養(yǎng)基生長(zhǎng)的銅綠假單胞菌感染秀麗隱桿線蟲后,各實(shí)驗(yàn)組平均生存時(shí)間和產(chǎn)卵量均低于對(duì)照組(P0.05),秀麗隱桿線蟲生長(zhǎng)發(fā)育緩慢,運(yùn)動(dòng)的靈活性降低；2.秀麗隱桿線蟲感染銅綠假單胞菌后體內(nèi)的cyp35A1、cyp35A2、cyp35A5和cyp35C1等毒物-藥物代謝基因表達(dá)均上調(diào)；3.秀麗隱桿線蟲攝食銅綠假單胞菌后體內(nèi)脂肪的儲(chǔ)存減少；4.在LB培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的銅綠假單胞菌釋放的綠膿菌素濃度最高,而在TSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的銅綠假單胞菌釋放的彈性蛋白和外分泌蛋白濃度最高(P0.01)。結(jié)論：銅綠假單胞菌的增殖和毒力受生長(zhǎng)環(huán)境影響,培養(yǎng)基不同,各種毒性分泌物比例不同,對(duì)秀麗隱桿線蟲的毒性也不同。同時(shí)秀麗隱桿線蟲體內(nèi)cyp35A1、cyp35A2、cyp35A5和cyp35C1等毒物-藥物代謝通路上相關(guān)基因表達(dá)上調(diào),說明cyp35家族基因?qū)︺~綠假單胞菌毒素代謝密切相關(guān)。彈性蛋白酶和綠膿菌素是銅綠假單胞菌導(dǎo)致線蟲死亡的主要毒力因子,彈性蛋白酶可能是TSA培養(yǎng)基上培養(yǎng)的銅綠假單胞菌引起秀麗隱桿線蟲快速致死的主要因素,而綠膿菌素是導(dǎo)致秀麗隱桿線蟲生長(zhǎng)發(fā)育緩慢的最主要因素；QS密度感應(yīng)系統(tǒng)在對(duì)秀麗隱桿線蟲的感染中發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。
【關(guān)鍵詞】：秀麗隱桿線蟲 銅綠假單胞菌 cyp35 綠膿菌素
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R378
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 第一部分 前言9-17
• 1.1 秀麗隱桿線蟲9-12
• 1.1.1 秀麗隱桿線蟲的發(fā)現(xiàn)與生物學(xué)特性9-11
• 1.1.2 秀麗隱桿線蟲-細(xì)菌感染模型的建立與應(yīng)用11-12
• 1.2 銅綠假單胞菌的致病性12-14
• 1.3 銅綠假單胞菌-秀麗隱桿線蟲細(xì)菌感染模型的研究進(jìn)展14
• 1.4 秀麗隱桿線蟲細(xì)胞色素P450和cyp35家族基因的研究進(jìn)展14-17
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)材料和方法17-25
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與藥品17
• 2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器17-18
• 2.4 實(shí)驗(yàn)方法18-25
• 2.4.1 培養(yǎng)基配制18-19
• 2.4.2 銅綠假單胞菌和大腸桿菌(E.coli OP50)的培養(yǎng)、保存和復(fù)蘇19
• 2.4.3 秀麗隱桿線蟲的培養(yǎng)、保存和復(fù)蘇19-20
• 2.4.4 細(xì)菌感染模型的建立20
• 2.4.5 壽命的測(cè)定20
• 2.2.6 生殖率的測(cè)定20-21
• 2.4.7 運(yùn)動(dòng)能力的測(cè)定21
• 2.4.8 秀麗隱桿線蟲體長(zhǎng)的觀察21
• 2.4.9 線蟲總RNA的提取及反轉(zhuǎn)錄21-23
• 2.4.10 秀麗隱桿線蟲脂肪染色23-24
• 2.4.11 不同液體培養(yǎng)液中銅綠假單胞菌的密度和毒性分泌物的測(cè)定24-25
• 第三部分 實(shí)驗(yàn)結(jié)果25-33
• 3.1 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲壽命、生殖和運(yùn)動(dòng)能力的毒性作用25-29
• 3.1.1 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲壽命的影響25-27
• 3.1.2 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲生殖的抑制作用27-28
• 3.1.3 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲生長(zhǎng)發(fā)育的抑制作用28
• 3.1.5 秀麗隱桿線蟲感染后銅綠假單胞菌后運(yùn)動(dòng)行為的變化28-29
• 3.2 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲體內(nèi)cyp35家族基因中A1、A2、A5、C1表達(dá)的調(diào)控作用29-31
• 3.2.1 秀麗隱桿線蟲RNA的提取29
• 3.2.2 秀麗隱桿線蟲體內(nèi)cyp35家族基因中A1、A2、A5和C1的表達(dá)上調(diào)29-30
• 3.2.3 熒光定量PCR產(chǎn)物的驗(yàn)證30-31
• 3.3 銅綠假單胞菌減少秀麗隱桿線蟲體內(nèi)的脂肪儲(chǔ)存量31
• 3.4 銅綠假單胞菌在不同培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)特點(diǎn)31-33
• 3.4.1 四組液體培養(yǎng)基中銅綠假單胞菌產(chǎn)綠膿菌素的分泌特點(diǎn)31-32
• 3.4.2 不同固體培養(yǎng)基上銅綠假單胞菌菌苔特征32-33
• 第四部分 討論33-39
• 4.1 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲壽命、生長(zhǎng)發(fā)育、生殖和運(yùn)動(dòng)能力的毒性作用33-35
• 4.1.1 銅綠假單胞菌對(duì)壽命的影響33-34
• 4.1.2 銅綠假單胞菌對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育和生殖的抑制作用34-35
• 4.1.3 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲運(yùn)動(dòng)能力的影響35
• 4.2 銅綠假單胞菌毒性分泌物對(duì)秀麗隱桿線蟲cyp35家族基因表達(dá)的調(diào)控作用35-37
• 4.4 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲體內(nèi)脂肪儲(chǔ)存的影響37-38
• 4.5 銅綠假單胞菌對(duì)秀麗隱桿線蟲的毒力38-39
• 結(jié)論39
• 研究展望39-40
• 參考文獻(xiàn)40-45
• 英文縮略詞匯45-46
• 在學(xué)期間的研究成果46-47
• 致謝47

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