登革病毒（dengue virus,DENV）是黃病毒屬、有包膜的的單股正鏈RNA病毒,由于包膜蛋白的抗原性不同,它分為四種血清型,即DENV1⁴。DENV以蚊蟲為媒介廣泛流行于熱帶和亞熱帶地區(qū)。每年,登革病毒會導致數(shù)百萬人感染,引起登革熱（denque classical fever,DF）和登革出血熱/休克綜合癥（dengue hemorrhagic fever/ dengue shock syndrome, DHF/DSS）。DF是自限性發(fā)熱性疾病;而DHF/DSS則是威脅患者生命的重癥,其主要特征是血管通透性顯著增加,導致血漿滲漏。每年有大約50萬DHF/DSS患者需要及時入院治療,否則病死率高達50%。然而,DHF/DSS的發(fā)病機制,以及DENV與宿主細胞之間相互作用的機制尚不清楚。DENV只有一個開放閱讀框（ORF）,編碼三種結(jié)構(gòu)蛋白和七種非結(jié)構(gòu)蛋白,從5’端到3’端依次為5’-C-prM（M）-E-NS1-NS2a-NS2b-NS3-NS4a-NS4b-NS5-3’。DENV最外層的包膜是有包膜糖蛋白（envelope protein, E）二聚體組... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學重慶市

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

細胞微絲骨架在DENV2感染后的排布變化

絲骨架干擾藥物影響 DENV2 的進入效率為了研究微絲骨架在 DENV2 進入細胞過程中的作用，本實驗主要觀察藥物毒感染率的變化。首先，用不同濃度的 jas 和 cyt D 處理 Vero 細胞 5、3 或 1入 DENV2( 100～200 PFU)感染 1 小時。結(jié)果顯示，jas 和 cyt D 均能抑制 D染率，且抑制效果與藥物預(yù)作用時間和藥物劑量呈現(xiàn)一定的依賴關(guān)系(圖 2)。度組中，預(yù)處理 1 小時對感染率幾乎沒有影響； jas 高濃度預(yù)處理 5 小時后降為對照組的 75％左右。與 jas 比較，cyt D 預(yù)處理對 DENV2 感染效率的抑為顯著。cyt D 低濃度預(yù)處理 1 小時后，感染率降為對照組的 85％；而 cyt D處理 5 小時或 3 小時后，感染率僅為對照組的 50％左右。這些結(jié)果提示干擾能夠降低 DENV2 的感染效率。

結(jié)果提示病毒釋放可能更需要微絲自由地進行再聚合。通過計算上清病毒滴度：細胞內(nèi)病毒滴度的比值與對照組相比的百分比值，進一步證實了上述推測。結(jié)果顯示，隨著作用時間的減少，jas 組的比值由 60％逐漸恢復至 100％。而 cytD 組的比值始終低于對照組，尤其是藥物作用于 3～9 小時或 6～9 小時時，比值僅為 50％(圖 3)，提示病毒釋放受到了抑制。免疫熒光染色結(jié)果證實，藥物持續(xù)作用導致 DENV2 抗原在胞內(nèi)的大量堆積。病毒感染之后，立即加入 jas 或 cytD 并持續(xù)作用 72 小時，結(jié)果發(fā)現(xiàn)大量病毒抗原以團塊狀分布在胞漿中(尤其是胞核附近)， 而模擬感染組中，病毒抗原較有規(guī)律地分布在胞核的一側(cè)，熒光強度明顯弱于藥物處理組(圖 4)，結(jié)果表明干擾微絲骨架系統(tǒng)抑制了DENV2 的釋放。綜合以上結(jié)果，我們認為 3～9 小時是 DENV2 釋放的關(guān)鍵時期，而病毒在釋放的過程中需要微絲自由地進行再聚合。


本文編號：3029815