1995年，人類首次利用圓形精子細(xì)胞和長形精子細(xì)胞體外授精獲得成功后，預(yù)示著精子細(xì)胞顯微注射授精可用于治療臨床無法治愈的男性不育患者。目前，完全不能產(chǎn)生精子的非梗阻性無精子癥（non-obstmctive azoospermia,NOA）患者可采用卵胞質(zhì)內(nèi)圓形精子細(xì)胞注射（round spermatid injection,ROSI）或長形精子細(xì)胞注射（elongated spermatid inection,ELSI）治療，精子細(xì)胞可從精液或從睪丸活檢組織中獲取。甚至已經(jīng)有采用凍融睪丸組織中精子細(xì)胞行ROSI后獲得持續(xù)妊娠的報(bào)告。 但精子細(xì)胞的受精率和妊娠率令人失望，限制這項(xiàng)技術(shù)成功和阻礙其臨床應(yīng)用的許多問題仍然沒有解決。除精子細(xì)胞的核蛋白不完全成熟及卵子激活不足等因素外，如何正確選擇存活精子細(xì)胞是個(gè)難題，如圓形精子細(xì)胞與精母細(xì)胞、單核細(xì)胞和多形核白細(xì)胞等其他圓形細(xì)胞的區(qū)分就比較困難。另一方面，已經(jīng)報(bào)道了多種不同的方法可從睪丸中分離精子細(xì)胞。最常用的是機(jī)械方法，即利用細(xì)針將活檢獲得的小塊睪丸組織撕開，釋放出精子細(xì)胞；也可利用酶將睪丸組織消化成細(xì)胞懸液，其中包含所有類型的生精細(xì)胞... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 小鼠睪丸精子細(xì)胞的分離與鑒定
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、主要試劑與器材
        1.2 試劑配制
        1.3 制備小鼠睪丸細(xì)胞懸液
        1.4 Percoll梯度分離
        1.5 細(xì)胞密度測(cè)定
        1.6 伊紅Y排斥試驗(yàn)
        1.7 瑞-姬染色
        1.8 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定
        1.9 卵胞質(zhì)內(nèi)精子細(xì)胞顯微注射
        1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2 結(jié)果
        2.1 組合酶消化結(jié)果
        2.2 Percoll梯度分離
        2.3 精子細(xì)胞顯微注射
    3 分析與討論
第二部分 不育患者精液中精子細(xì)胞的分離與鑒定
    1 材料與方法
        1.1 主要試劑與儀器
        1.2 精液標(biāo)本
        1.3 非連續(xù)Percoll梯度分離
        1.4 瑞-姬染色
        1.5 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        1.6 流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定
        1.7 免疫細(xì)胞化學(xué)測(cè)定
        1.8 熒光原位雜交（FISH）
        1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2 結(jié)果
        2.1 細(xì)胞染色
        2.2 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.3 流式細(xì)胞術(shù)
        2.4 免疫細(xì)胞化學(xué)
        2.5 FISH
    3 分析與討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
研究生期間主要學(xué)術(shù)成果
致謝
綜述及參考文獻(xiàn)
    精子細(xì)胞顯微注射授精



本文編號(hào)：3030211