以含有丙肝病毒（Hepatitis C Virus,HCV）全基因組cDNA的重組質(zhì)粒（pHCV）為材料,通過基因轉染,重組痘病毒輔助使之在HeLa細胞中產(chǎn)生HCV病毒體,建立了一種新的HCV體外細胞培養(yǎng)系統(tǒng)。采用RT-PCR、熒光定量RT-PCR、鏈特異性RT-PCR、免疫印跡、免疫電子顯微鏡和電子顯微鏡負染技術跟蹤檢測HCV的復制、蛋白表達、裝配、釋放和二次感染情況,評估該細胞培養(yǎng)體系HCV的產(chǎn)生效率,檢測結果如下: 1、RT-PCR、鏈特異性RT-PCR的檢測結果顯示,在轉染的HeLa細胞內(nèi)有HCV正、負鏈的合成。而熒光定量RT-PCR的測定結果表明,pHCV可在轉染的HeLa細胞中高效復制HCV基因組,產(chǎn)生的HCV基因組達到10⁷基因拷貝/mL,遠遠高于病人血清中的HCV基因拷貝數(shù),也高于迄今報道的HCV細胞培養(yǎng)體系的復制效率。且HCV基因拷貝數(shù)的增加是一個動態(tài)的變化過程,呈現(xiàn)先逐步升高,達到一個峰值后緩緩下降的趨勢。 2、Western-blot檢測結果顯示,本培養(yǎng)體系中有HCV結構蛋白（E2,Core）和非結構蛋白（NS5）的表達,其分子量... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

丙型肝炎病毒基因結構及多聚蛋白加工圖(Bartensehlageretal，2001)

SA承擔了同樣的作用。NSSA磷酸化是通過目前仍不知道的細胞胞內(nèi)激酶介導的l，1997;Reedetal，1997:Tanjietal，1995b)。此外，Ns5A蛋白可能參與了]FN誘染細胞的抗性作用。至少從分離的HCV株看來，NSSA能夠結合PKR，使IFN處的病毒翻譯水平不致降低(Galeetal，1997，1998)。在NSSA相當于所編碼產(chǎn)物第2209一2248位氨基酸殘叢的區(qū)域存在干擾素敏感區(qū)(sIDR)，被認為是不卜JiHCV對干擾素治療反應性有差異的分子結構基礎。NSSB經(jīng)認定是HCV復制所賴于RNA的RNA聚合酶(RdRp)。NSSB基因區(qū)是高度遺傳保守的。不僅僅在的不同基因型間，而且與瘟病毒、黃病毒以及其他的RNA病毒比較，都是高度特別是具有作為RNA聚合酶特征序列的G一D一D位點在黃病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒葉病毒中都是一致的(AIetal，1998;Behrensetal，1996:Lohmannetal，1997:ashitaetal，1998;Yuanetal，1997)。、丙肝病毒的復制

了卓有成效的工作。他們探索了HCV基因組適應性突變對病毒亞基因組RNA復制通過對26個不同適應性突變位點的HVC亞基因組復制子的復制效率進行比較，尋病毒NRA復制效率提高的保守性突變位點(如圖1.4所示)。結果發(fā)現(xiàn)在非結構蛋的每一個突變位點幾乎都會使HVC的復制效率有所提高。其中，位于NS3區(qū)的突病毒NRA復制效率提高影響不大，但當其與高適應性突變位點結合在一起時具有，可以使RNA的復制效率大大提高(Lohmnna.etal2003)。如位于NS3區(qū)的E1202G2801突變位點可以分別使HCV病毒RNA的復制效率提高14倍和7倍，而這兩個突變合在一起時可以使突變效率提高25倍。當這兩個突變位點與NSSA區(qū)的52197P共同起作用時復制效率會有更大的提高(Blightetal，2003)。位于Ns4B、Ns5A、N變位點是細胞高適應性突變位點，能使病毒RNA復制效率有較大的提高，但是這點間不具有協(xié)同效應。


本文編號：2969606