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原代肝細(xì)胞的分離培養(yǎng)及HBV感染肝細(xì)胞模型的建立

發(fā)布時(shí)間:2021-01-04 15:30
  乙型肝炎是一種由病毒引起的慢性疾病,不易徹底治愈,并隨著病情的發(fā)展有可能惡化成肝硬化、肝癌;這種疾病在我國(guó)仍有較高的感染率。因此,對(duì)乙型肝炎病毒(Hepatitis B. virus, HBV)的研究無疑有著重要的意義。自1965年Blumberg等發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒表面抗原,到1997年病毒全基因組的克隆和測(cè)序完成,人們對(duì)HBV的基因組成和抗原的結(jié)構(gòu)、生物特性及其生命周期的認(rèn)識(shí)迅速發(fā)展。但因缺乏體外的增殖系統(tǒng)和易獲得的動(dòng)物模型,細(xì)胞模型,HBV感染肝臟的早期機(jī)理研究進(jìn)展較為緩慢;從而在一定程度上影響乙型肝炎及其相關(guān)肝病的基礎(chǔ)和臨床研究。在眾多新近發(fā)展起來的研究方法中,建立一個(gè)理想的細(xì)胞模型是了解感染機(jī)理的有效途徑之一。由于人的肝組織來源有限,而且HBV有很強(qiáng)的宿主專一性。實(shí)驗(yàn)選擇亞洲樹鼩作為原代肝細(xì)胞的供體,它具有與人源肝細(xì)胞類似的受HBV感染行為。 整個(gè)實(shí)驗(yàn)分為兩大部分: (1)原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng) (2)尋找與確定高效率的感染途徑 實(shí)驗(yàn)首先用原位灌注法獲得小鼠肝細(xì)胞、樹鼩肝細(xì)胞,繼而在含10%的胎牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中建立相關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)體系,細(xì)胞貼壁效... 

【文章來源】:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)湖南省

【文章頁數(shù)】:43 頁

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
中文摘要
英文摘要
第一章 前言
第二章 膠原酶原位灌注法分離原代肝細(xì)胞系統(tǒng)的建立
    1. 材料與方法
    2. 結(jié)果與討論
    3. 小結(jié)
第三章 小鼠原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)
    1. 材料與方法
    2. 結(jié)果與討論
    3. 小結(jié)
第四章 與HBV感染肝細(xì)胞效率相關(guān)因素的確定
    1. 材料和主要試劑
    2. 方法
    3. 結(jié)果與討論
    4. 小結(jié)
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)歷



本文編號(hào):2956998

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