摘 要 本研究探討不同的飼養(yǎng)層、胎齡、細(xì)胞因子及添加物對小鼠胚胎源ES細(xì)胞和PGCs源人、小鼠胚胎干細(xì)胞分離克隆的影響，得到早期傳代的人、小鼠類ES細(xì)胞。 1．MEF、bEF、hEF三種飼養(yǎng)層細(xì)胞對小鼠胚胎（囊胚）貼壁率和ICM擴增率分別為91.5%a、76.2%b、64.2%c；74.8%a;、69.8%b’、38.47%c’，各組間差異顯著（除a’∶b’，P>0.05，其余P<0.05）。同源MEF飼養(yǎng)層細(xì)胞最有利于小鼠胚胎源ES細(xì)胞的分離培養(yǎng)。2．自9.5-13.5dpc小鼠胎兒PGCs可以獲得早期傳代類ES的胞系。7.5-8.5及14.5-15.5dpc小鼠胎兒原代培養(yǎng)觀察到類ES細(xì)胞集落，16.5-18.5dpc小鼠胎兒原代培養(yǎng)未觀察到類ES細(xì)胞。3．總共收集分離流產(chǎn)兒136例，其中110例4-13W胎兒中56例觀察到類ES細(xì)胞集落。39例做傳代培養(yǎng)，H58傳至9代，7例傳至5代以上。4．自4-13W流產(chǎn)兒PGCs均可分離到人類ES細(xì)胞。5-10W流產(chǎn)兒最適于PGCs源的人類ES細(xì)胞的分離克隆，5W以下或大于17W流產(chǎn)兒難于得到PGCs源的人類E... 

【文章來源】：西北農(nóng)林科技大學(xué)陜西省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
文獻(xiàn)綜述
1 前言
2 哺乳動物ES細(xì)胞研究歷史
3 早期胚胎源的哺乳動物ES細(xì)胞的研究進展
    3.1 小鼠ES細(xì)胞
    3.2 豬ES細(xì)胞
    3.3 牛ES細(xì)胞
    3.4 羊ES細(xì)胞
    3.5 兔ES細(xì)胞
    3.6 水貂ES細(xì)胞
    3.7 倉鼠ES細(xì)胞
    3.8 靈長類動物和人類ES細(xì)胞
4 PGCs源的哺乳動物ES細(xì)胞研究進展
    4.1 自PGCS分離克隆ES細(xì)胞系的優(yōu)勢
    4.2 自PGCS分離克隆各種哺乳動物ES細(xì)胞的研究進展
        4.2.1 小鼠
        4.2.2 大鼠
        4.2.3 兔
        4.2.4 豬
        4.2.5 羊
        4.2.6 牛
        4.2.7 人
    4.3 關(guān)于自PGCS分離克隆哺乳動物ES細(xì)胞幾個問題的探討
        4.3.1 PGCS能轉(zhuǎn)化成ES細(xì)胞
        4.3.2 EG細(xì)胞不有完全替代ES細(xì)胞
5 ES細(xì)胞建系
    5.1 ES細(xì)胞材料的獲取
        5.1.1 早期胚胎的獲取處理
        5.1.2 PGCS的分離
    5.2 ES細(xì)胞的分化抑制培養(yǎng)
        5.2.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)基和一般添加物
        5.2.2 分化抑制物
        5.2.3 生長因子
        5.2.4 抗凋亡劑
    5.3 ES細(xì)胞的克隆
    5.4 ES細(xì)胞的冷凍與解凍
    5.5 ES細(xì)胞的鑒定
        5.5.1 ES細(xì)胞的形態(tài)特征和生長特性
        5.5.2 ES細(xì)胞的核型
        5.5.3 ES細(xì)胞冷凍、解凍
        5.5.4 ES細(xì)胞表達(dá)的酶，細(xì)胞表面抗原和受體
        5.5.5 ES細(xì)胞的端粒酶活性
        5.5.6 ES細(xì)胞的高度分化潛能
6 影響ES細(xì)胞分離克隆的因素
7 ES細(xì)胞的應(yīng)用前景與展望
    7.1 生產(chǎn)克隆動物的高效材料
    7.2 ES細(xì)胞是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動物的高效載體
    7.3 發(fā)育生物學(xué)研究的理想體外模型系統(tǒng)
    7.4 高效新型藥物的發(fā)現(xiàn)、篩選及動物和人類疾病的模型
    7.5 細(xì)胞、組織和器官的修復(fù)與移植治療和基因治療的高效載體細(xì)胞
8 小結(jié)
實驗研究
    1 引言
    2 材料與施
        2.1 驗材料
            2.1.1 實驗動物
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 主要儀器
        2.2 實驗方法
            2.2.1 主要溶液配制
            2.2.2 胎兒成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)(小鼠、人流產(chǎn)兒
            2.2.3 小鼠、人胎兒成纖維細(xì)胞的繼代培養(yǎng)
            2.2.4 小鼠、人、牛胎兒成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層的制備
            2.2.5 小鼠、人原始生殖細(xì)胞（PGCs）的獲取
            2.2.6 ES細(xì)胞繼代培養(yǎng)
            2.2.7 ES細(xì)胞的鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 成纖維細(xì)胞的生長行為
        3.2 小鼠PGCs源ES細(xì)胞生長行為
            3.2.1 共培養(yǎng)法PGCs源小鼠ES細(xì)胞生長行為
            3.2.2 小鼠PGCs傳代后生長行為
            3.2.3 胎齡對自PGCS分離克隆小鼠ES細(xì)胞的影響
        3.3 人PGCs的體外培養(yǎng)
        3.4 自流產(chǎn)兒PGCs分離克隆ES細(xì)胞的效果
        3.5 培養(yǎng)液對自PGCs分離克隆人ES細(xì)胞的影響
            3.5.1 培養(yǎng)液中添加物對自PGCs分離克隆人類ES細(xì)胞的影響
        3.6 飼養(yǎng)層對ES細(xì)胞分離克隆的影響
        3.7 ES細(xì)胞的鑒定
    4 討論
        4.1 PGCs獲取對人、小鼠ES細(xì)胞分離克隆的影響
        4.2 胎齡對人、小鼠ES細(xì)胞分離克隆的影響
        4.3 細(xì)胞因子對人類ES細(xì)胞分離克隆的影響
        4.4 飼養(yǎng)層對人類ES細(xì)胞分離克隆的影響
        4.5 人、小鼠ES細(xì)胞的鑒定
    5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
附圖說明


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]體外定向誘導(dǎo)胚胎干細(xì)胞為造血細(xì)胞[J]. 徐令,喬春平,黃紹良,李樹濃,吳旋.  科學(xué)通報. 2000(08)

博士論文
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[2]牛胚胎干細(xì)胞的分離與克隆[D]. 安立龍.西北農(nóng)業(yè)大學(xué) 1999



本文編號：2956737