發(fā)布時間：2020-12-30 00:51

　　目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞源性外泌體對體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞增殖和遷移的調(diào)節(jié)作用。方法:體外分別培養(yǎng)新西蘭兔的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）和軟骨細(xì)胞;超高速離心法收集BMSCs源性外泌體（BMSC-Exos）;透射電鏡觀察BMSC-Exos的形狀和大小;Western blot鑒定BMSC-Exos表面標(biāo)記;MTT法檢測不同劑量的BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)作用,以及給予IL-1β刺激后軟骨細(xì)胞增殖的變化;熒光顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞對BMSC-Exos的攝取;劃痕試驗分析BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞遷移的調(diào)節(jié)作用。結(jié)果:獲取的BMSC-Exos呈近似球形,直徑40～100 nm,表面表達(dá)CD63和CD81。40μg/mL、80μg/mL和120μg/mL含量的外泌體均可顯著促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖（P<0.05）,80μg/mL與120μg/mL含量外泌體的作用沒有顯著差異。BMSC-Exos能夠被軟骨細(xì)胞攝取。BMSC-Exos與軟骨細(xì)胞共培養(yǎng),劃痕愈合率由44%上升至63%（P<0.05）。結(jié)論:BMSC-Exos能夠促進(jìn)體外培養(yǎng)的軟骨細(xì)胞增殖和遷移,具有作為一種新型非細(xì)... 

【文章來源】：中國運動醫(yī)學(xué)雜志. 2019年01期 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

BMSC-Exos的鑒定左：透射電鏡觀察外泌體（箭頭所示為外泌體）；右：Westernblot檢測外泌體表面蛋白標(biāo)記

中國運動醫(yī)學(xué)雜志2019年1月第38卷第1期ChinJSportsMed，Jan.2019，Vol.38，No.1的情況。如圖4所示，BMSC-Exos被Dil標(biāo)記為紅色，軟骨細(xì)胞的細(xì)胞核被DAPI標(biāo)記為藍(lán)色。通過熒光顯微鏡，觀察到紅色標(biāo)記的BMSC-Exos能夠被軟骨細(xì)胞攝取，且在共培養(yǎng)8h的時候，BMSC-Exos主要集中在軟骨細(xì)胞的細(xì)胞核周邊。左：共培養(yǎng)4h；右：共培養(yǎng)8h圖4熒光顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞對BMSC-Exos的攝取2.5BMSC-Exos能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞遷移如圖5和表1所示，軟骨細(xì)胞培養(yǎng)24h后，劃痕愈合率約44%，當(dāng)給予軟骨細(xì)胞BMSC-Exos共培養(yǎng)24h后，劃痕間距明顯減小，劃痕愈合率上升至約63%，愈合率顯著升高（P<0.05）。表1劃痕愈合率（%，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）組別對照組外泌體組愈合率44.29±4.2063.49±4.49**P<0.05，與對照組相比圖5BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞遷移的影響2.6BMSC-Exos抑制IL-IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞增殖能力下降IL-1β是OA的重要前炎癥細(xì)胞因子。因此在軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入BMSC-Exos和IL-1β，觀察BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞的保護作用。如圖6所示，IL-1β能夠時間依賴性抑制軟骨細(xì)胞的增殖（P<0.05），而BMSC-Exos能夠完全逆轉(zhuǎn)IL-1β的作用。*P<0.05，與對照組相比圖6IL-1β刺激下BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞增殖的檢測3討論外泌體是由細(xì)胞分泌的，脂質(zhì)雙分子層包裹的，含有mRNA、miRNA和蛋白質(zhì)等多種小分子的囊泡。幾乎所有細(xì)胞均可產(chǎn)生外泌體，如免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞、干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等[11，12]。隨著研究的進(jìn)展，細(xì)胞治療逐漸受到重視。由于低

中國運動醫(yī)學(xué)雜志2019年1月第38卷第1期ChinJSportsMed，Jan.2019，Vol.38，No.1的情況。如圖4所示，BMSC-Exos被Dil標(biāo)記為紅色，軟骨細(xì)胞的細(xì)胞核被DAPI標(biāo)記為藍(lán)色。通過熒光顯微鏡，觀察到紅色標(biāo)記的BMSC-Exos能夠被軟骨細(xì)胞攝取，且在共培養(yǎng)8h的時候，BMSC-Exos主要集中在軟骨細(xì)胞的細(xì)胞核周邊。左：共培養(yǎng)4h；右：共培養(yǎng)8h圖4熒光顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞對BMSC-Exos的攝取2.5BMSC-Exos能夠促進(jìn)軟骨細(xì)胞遷移如圖5和表1所示，軟骨細(xì)胞培養(yǎng)24h后，劃痕愈合率約44%，當(dāng)給予軟骨細(xì)胞BMSC-Exos共培養(yǎng)24h后，劃痕間距明顯減小，劃痕愈合率上升至約63%，愈合率顯著升高（P<0.05）。表1劃痕愈合率（%，均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）組別對照組外泌體組愈合率44.29±4.2063.49±4.49**P<0.05，與對照組相比圖5BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞遷移的影響2.6BMSC-Exos抑制IL-IL-1β誘導(dǎo)的軟骨細(xì)胞增殖能力下降IL-1β是OA的重要前炎癥細(xì)胞因子。因此在軟骨細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入BMSC-Exos和IL-1β，觀察BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞的保護作用。如圖6所示，IL-1β能夠時間依賴性抑制軟骨細(xì)胞的增殖（P<0.05），而BMSC-Exos能夠完全逆轉(zhuǎn)IL-1β的作用。*P<0.05，與對照組相比圖6IL-1β刺激下BMSC-Exos對軟骨細(xì)胞增殖的檢測3討論外泌體是由細(xì)胞分泌的，脂質(zhì)雙分子層包裹的，含有mRNA、miRNA和蛋白質(zhì)等多種小分子的囊泡。幾乎所有細(xì)胞均可產(chǎn)生外泌體，如免疫細(xì)胞、上皮細(xì)胞、干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等[11，12]。隨著研究的進(jìn)展，細(xì)胞治療逐漸受到重視。由于低


本文編號：2946652