P選擇素（CD62P、PADGEM、GMP140）是細(xì)胞粘附分子選擇素家族成員，主要參與介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的起始粘附，與免疫損傷、炎癥反應(yīng)、血栓形成、淋巴細(xì)胞再循環(huán)等有密切聯(lián)系。 本研究從人血小板中提取總RNA，經(jīng)RT-PCR得到P-選擇素cDNA基因，用PCR方法擴(kuò)增其中的Lectin-EGF片段，并將其克隆到原核表達(dá)載體PBV220中，通過(guò)酶切，PCR和基因序列分析確定重組入載體的片段為目的基因的核苷酸序列。再將其轉(zhuǎn)化宿主菌DH5α，以包涵體形式表達(dá)人P-選擇素胞外區(qū)Lectin-EGF片段蛋白，蛋白經(jīng)變性、復(fù)性后分別配置成40ng／ml、30ng／ml、20ng／ml、10ng／ml的PBS溶液，包被于組織培養(yǎng)皿上，并對(duì)抗活化血小板表面受體全套單鏈抗體噬菌體展示文庫(kù)進(jìn)行四輪篩選，再以150ng每孔包被酶標(biāo)板，篩選到3個(gè)陽(yáng)性克隆，抽提其質(zhì)粒進(jìn)行PCR檢測(cè)可擴(kuò)增出780bp特異條帶，與單鏈抗體基因預(yù)計(jì)值相符，pET20b（+）系統(tǒng)成功表達(dá)了篩選到的單鏈抗體，為今后進(jìn)一步研究打下基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：34 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Lectin一EGF基因克隆的瓊脂糖凝膠電泳分析

GF基因表達(dá)產(chǎn)物的SDS一PAG中、低分子量Marker(94KDKD、14KD)2.誘導(dǎo)2h3.3、討論一140、cD62p、PADGEM)管狀(weibelpalade)小體全長(zhǎng)789個(gè)氨基酸。N末端素樣結(jié)構(gòu)域(lectin一likedomainmain)和9個(gè)補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白4個(gè)氨基酸構(gòu)成跨膜區(qū)、35，人們對(duì)其生物學(xué)功能與分

的基因克隆及單鏈抗體初篩與表達(dá)載體Pet20b(+)連接，達(dá)sh，留取誘導(dǎo)前樣本以及2、結(jié)果n一EGF片段包涵體的分離、洗后去除了細(xì)菌中大量的雜蛋白然后緩慢復(fù)性，透析，Bradford23


本文編號(hào)：2944475