本文關(guān)鍵詞：Jnk2通過smARF的降解來調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：自噬是一個(gè)自我清理的過程,通過細(xì)胞質(zhì)蛋白質(zhì)和細(xì)胞器被隔離在一個(gè)雙層膜自噬體中,然后它通過與溶酶體融合形成自噬溶酶體來降解細(xì)胞質(zhì)蛋白,大分子和細(xì)胞器,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞本身的代謝需要和某些細(xì)胞器的更新。我們將細(xì)胞通過自噬機(jī)制清除受損或不需要的線粒體的途徑稱為線粒體自噬,這里我們將研究重點(diǎn)放在線粒體自噬上。線粒體自噬是一個(gè)特異性的選擇過程,并受到各種因子的精密調(diào)節(jié),對(duì)維持細(xì)胞的動(dòng)態(tài)平衡是至關(guān)重要的,但是其詳細(xì)的調(diào)控機(jī)制在很大程度上是未知的。線粒體自噬的異常調(diào)控已經(jīng)涉及到許多疾病和病理生理活動(dòng)。眾多研究表明JNK信號(hào)通路在人類疾病中發(fā)揮十分重要和復(fù)雜的作用。它在細(xì)胞周期、生殖、凋亡和細(xì)胞應(yīng)激等多種生理過程中也起到了很重要的作用。JNK是c-Jun氨基末端激酶又稱應(yīng)激活化蛋白激酶,JNK蛋白激酶由三個(gè)基因編碼,JNK1、JNK2和JNK3。JNK1和JNK2基因在全身廣泛表達(dá),而JNK3呈限制性表達(dá)。我們的研究表明,在細(xì)胞壓力或外界條件刺激下,JNK2通過調(diào)節(jié)sm ARF蛋白的表達(dá)誘導(dǎo)了細(xì)胞線粒體自噬。sm ARF是在線粒體上特異性表達(dá)的腫瘤抑制蛋白ARF的亞型形式,也可以說是在線粒體上特異性表達(dá)的腫瘤抑制蛋白ARF的可變剪切亞型。有研究表明通過外源過度表達(dá)sm ARF蛋白水平能誘導(dǎo)線粒體的去極化和隨后的線粒體自噬。在這篇文章中,我們發(fā)現(xiàn)JNK2能促進(jìn)sm ARF蛋白的泛素化,導(dǎo)致了內(nèi)源sm ARF蛋白通過蛋白酶體途徑降解。在JNK2缺陷型細(xì)胞中,sm ARF蛋白的失調(diào)導(dǎo)致了其在細(xì)胞中過多的積累,從而抑制了壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬活性,使受損的線粒體不能通過線粒體自噬被清除,進(jìn)而積累了過多的線粒體活性氧(ROS)。有文章報(bào)道表明線粒體自噬缺陷能夠產(chǎn)生過多的活性氧(ROS),而過多的活性氧(ROS)可以導(dǎo)致炎癥的過度活化。在這篇文章中我們又發(fā)現(xiàn),在缺氧壓力下,JNK2基因缺陷的小鼠顯示有缺陷的線粒體自噬,導(dǎo)致組織損傷。我們的研究發(fā)現(xiàn)能一種新穎的維持免疫穩(wěn)態(tài)機(jī)制,通過這種機(jī)制進(jìn)而保護(hù)組織的損傷,這為更進(jìn)一步了解一些疾病的治療策略提供了一定的參考價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：線粒體自噬 JNK2 smARF 組織損傷 泛素化
【學(xué)位授予單位】：浙江理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-5
• Abstract5-8
• 1 研究背景8-13
• 1.1 線粒體自噬8-9
• 1.1.1 細(xì)胞自噬和線粒體自噬8-9
• 1.1.2 線粒體自噬的機(jī)制9
• 1.2 JNK信號(hào)通路9-10
• 1.3 smARF和泛素蛋白酶體途徑10-11
• 1.3.1 smARF10-11
• 1.3.2 泛素蛋白酶體途徑11
• 1.4 研究目的和意義11-13
• 2 實(shí)驗(yàn)材料13-15
• 2.1 細(xì)胞系13
• 2.2 質(zhì)粒和細(xì)菌13
• 2.3 siRNA的合成和序列13-14
• 2.4 實(shí)驗(yàn)試劑14
• 2.5 抗體信息14
• 2.6 小鼠14-15
• 3 實(shí)驗(yàn)方法15-29
• 3.1 質(zhì)粒和siRNA的轉(zhuǎn)染（6 孔板）15
• 3.2 Western blot15-17
• 3.2.1 細(xì)胞中的蛋白樣品 (以六孔板為例)15-16
• 3.2.2 組織中的蛋白樣品16
• 3.2.3 制膠和電泳16
• 3.2.4 轉(zhuǎn)膜和封閉16-17
• 3.2.5 抗體孵育和顯影17
• 3.3 免疫共沉淀CO-IP17-19
• 3.3.1 鋪板17
• 3.3.2 準(zhǔn)備beads17-18
• 3.3.3 樣品抗體共孵育18
• 3.3.4 CO-IP樣品的制備18
• 3.3.5 蛋白檢測18-19
• 3.4 泛素化實(shí)驗(yàn)19
• 3.5 細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的抽提19-20
• 3.5.1 樣品的制備19-20
• 3.5.2 細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核的抽提20
• 3.6 線粒體/細(xì)胞質(zhì)的分離抽提20-22
• 3.6.1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備21
• 3.6.2 細(xì)胞抽提21-22
• 3.7 轉(zhuǎn)化22
• 3.8 質(zhì)粒DNA提取22-26
• 3.8.1 少量質(zhì)粒DNA的抽提22-23
• 3.8.2 大量質(zhì)粒DNA的提取23-26
• 3.9 線粒體活性氧（ROS）的測量26
• 3.10 熒光顯微鏡(Fluorescence microscopy)26-27
• 3.11 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)27
• 3.12 穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建27-29
• 4 結(jié)果29-44
• 4.1 JNK2 對(duì)壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬是必要的29-31
• 4.2 JNK2 能不依賴于PINK1/Parkin途徑正調(diào)節(jié)線粒體自噬31-33
• 4.3 JNK2 的缺失能穩(wěn)定smARF蛋白33-35
• 4.4 JNK2 能促進(jìn)smARF蛋白的泛素化和降解35-38
• 4.5 JNK2 能減緩缺氧誘導(dǎo)的組織損傷38-41
• 補(bǔ)充數(shù)據(jù)41-44
• 5 討論44-46
• 6 結(jié)論46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果51-52
• 致謝52-53

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  本文關(guān)鍵詞：Jnk2通過smARF的降解來調(diào)控壓力誘導(dǎo)的線粒體自噬及組織損傷，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：289056