結核病是目前單一致病菌感染導致死亡率最高的感染性疾病。其病原體結核桿菌,是一種細胞內寄生菌,它是以宿主免疫系統(tǒng)對抗微生物感染的重要成分之一——巨噬細胞作為其宿主細胞。結核感染后,機體可產(chǎn)生強有力的抗結核免疫應答,包括巨噬細胞、CD4~+T淋巴細胞、CD8~+T淋巴細胞等參與的細胞免疫應答及特異性體液免疫應答,以控制結核桿菌感染。然而,結核桿菌通過干擾T淋巴細胞對感染結核桿菌的巨噬細胞的識別及對抗巨噬細胞的殺菌機制等逃避宿主免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊,在機體內長期持續(xù)存活而呈潛伏感染狀態(tài)。當機體感染HIV、使用免疫抑制劑或衰老等導致免疫功能低下時,潛伏感染結核桿菌大量繁殖而引起結核病的發(fā)生。目前,全世界有三分之一的人口感染結核桿菌,其中有90%左右人群處于潛伏感染狀態(tài)。這一龐大的群體是結核發(fā)病的主要來源之一,因此也是控制結核病全球性蔓延的關鍵環(huán)節(jié)之一。
【學位單位】：四川大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2004
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

學碩士學位論文結核分支桿菌PE家族蛋白質Rvl818c梭基端片段免疫功能的研究測發(fā)現(xiàn)所提取的總RNA呈清晰的三條帶分布(285、185、5.顯降解(圖9)。以質粒penNA一ESAT一6、peDNA一EP轉/c3T3細胞總NRA為模板用珊I逆轉錄試劑盒合成總Dc以引物Pel和PpZ、Pel和PpZ進行PRC擴增檢測，結果約280bp及1.4kb的特異性條帶，而以此總RNA為模引物直接作PRC擴增或以空白質粒pDcNA3.1/Myc一HIS(胞的總RNA為模板進行RT一PRC擴增均未檢測到任何表明結核分支桿菌免疫優(yōu)勢抗原ESAT一6完整基T一6一PGRS融合基因能在Balb/c3T3細胞中進行穩(wěn)定表圖11)。附圖

Pel和P3e及PPI和PpZ分別進行PRC擴增，前二者均得到大小約28b0p的特異性片段，后者得到及1100Pb的特異片段，與預計目的基因片段大小相符。(圖2)二.真核重組質粒pDcNA一ESAT一6及pDcNA一EP的鑒定結果:1.真核重組質粒pcDNA一ESAT一的鑒定結果:pcDNA一ESAT一6陽性重組子分別經(jīng)BaHmI及EcRoI進行雙酶切，瓊脂糖凝膠電泳分別見到28Obp及5.ksb兩個片段(圖3)。以pDcNA一EsAT一6為模板，Pel及PeZ為引物擴增大小約280bp的特異性片段(圖4)。真核重組質粒pDcNA一ESAT一6經(jīng)華大基因上海鼎安生物科技有限公司測序，測序報告(圖7)確定重組質粒pDcNA一ESAT一6中正確連入ESAT一6開放讀碼框。上述結果表明真核重組質粒pDcNA一ESAT一6構建成功。2.真核重組質粒pDcNA一EP的鑒定結果:pcDNA一EP陽性重組子分別經(jīng)BaHnlI、BspTI和EeoRI及BaHnlI和EeoRI進行雙酶切，瓊脂糖凝膠電泳分別見到280bp、2.Ikb及5.skb、1.4kb及5.skb兩個片段(圖5)。peDNA一EP為模板，Pel及PpZ為引物擴增大小約1.4kb的特異性片段(圖6)。真核重組質粒pcDNA一EP經(jīng)\華大基因上海鼎安生物科技有限公司測序，測序報告(圖8)確定重組質粒pDcNA一EP中正確連入ESAT一6及PGRSRv18‘8c，且二者通過酶切位點BPsTI連接形成融合基因。上述結果表明真核重組質粒pcDNA一Ep構建成功。三.真核表達重組質粒pDcNA一ESAT一6及pcDNA一EP穩(wěn)定表達的RT一PCR鑒定結果:真核表達重組質粒pcDNA一ESAT一6及pDcNA一EP穩(wěn)定轉染Balb/c3T3細胞用Trizol試劑提取細胞總RNA

圖4重組質粒pDcNAeeESAT一的PCR鑒PCRamPlifieationofES戌I二6rfagmentrfoPlasmidPeDNA~ESA】二6M.marker(DL20(犯)，.APCRPorductESAeesrtrietionenZymemapofereomb三nantPla
【共引文獻】

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本文編號：2877586