發(fā)布時(shí)間：2020-11-10 10:02

　　 目的探討足細(xì)胞自噬在膜性腎病經(jīng)典動(dòng)物模型中的作用及其激活可能的細(xì)胞內(nèi)機(jī)制。方法將50只SPF級(jí)健康雄性SD大鼠隨機(jī)平均分為被動(dòng)腎炎(PHN)2d組、PHN4d組、PHN7d組、PHN21d組以及對(duì)照組,建立大鼠PHN模型。觀察足細(xì)胞形態(tài)的變化和自噬泡,并計(jì)算單個(gè)腎小球足細(xì)胞的數(shù)量。采用免疫組織化學(xué)染色法對(duì)腎小球內(nèi)膜攻擊復(fù)合物C5b-9的沉淀和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表達(dá)進(jìn)行檢測,用TUNEL法對(duì)腎小球內(nèi)細(xì)胞凋亡進(jìn)行檢測,Western印跡法對(duì)腎小球自噬相關(guān)蛋白LC3、GRP78、p-PERK、p-JNK、ATF6α的表達(dá)進(jìn)行檢測。結(jié)果至注射抗體后第21天可見典型模性腎病改變,而其尿蛋白量自建模3 d起有顯著上升,至21 d可達(dá)到(51.4±5.9)mg/24 h。P62蛋白并無在PHN模型大鼠腎小球內(nèi)發(fā)生堆積,故可確定LC3Ⅱ表達(dá)的提高非自噬流受阻導(dǎo)致�？捎^察到造模早期ATF6α、p-PERK、p-JNK有逐步上升的趨勢,但21 d(即后期)又開始回落。結(jié)論膜性腎病免疫介導(dǎo)的損傷可通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激從而增強(qiáng)足細(xì)胞自噬作用以保持其內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定及生存。
【部分圖文】：

相對(duì)少于７ｄ的表達(dá)水平，如圖４ａ所示。Ｐ６２蛋白并無在ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)發(fā)生堆積，如圖４ｂ所示，故可確定ＬＣ３Ⅱ表達(dá)的提高非自噬流受阻導(dǎo)致。并且透射電鏡下可觀察到造模后７ｄ和２１ｄＰＨＮ模型大鼠足細(xì)胞內(nèi)自噬浸泡數(shù)量相較于對(duì)照組出現(xiàn)明顯上升，如圖４所示。注：ａ為腎小球足細(xì)胞ＷＴ１抗原染色（ＤＡＢ染色×４００）；ｂ為腎小球足細(xì)胞計(jì)數(shù)，表示為均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差；ｎ＝８，相較于０ｄ組，Ｐ＜０．０５圖２ＰＨＮ模型大鼠腎小球足細(xì)胞特異性標(biāo)記及計(jì)數(shù)注：ａ為ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)活化ｃａｓｐａｓｅ－３的表達(dá)，細(xì)胞核呈棕黃色，示腎小球內(nèi)細(xì)胞凋亡；ｂ為ＴＵＮＥＬ檢測圖３ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)細(xì)胞凋亡（ＤＡＢ染色×４００）中國煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志２０１９年６月第２２卷第３期ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏａｌＩｎｄｕｓｔｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｕｎｅ２０１９，Ｖｏｌ．２２，Ｎｏ．３·３９２·

Ｎ模型大鼠腎小球內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的表達(dá)相較于對(duì)照組，研究對(duì)象的腎小球內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志物ＧＲＰ７８從造模２ｄ起呈逐漸上升趨勢，７ｄ時(shí)明顯比對(duì)照組高，但２１ｄ時(shí)卻回落至正常水平；并且在檢測非折疊蛋白反應(yīng)（ｕｎｆｏｌｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎｒｅ－ｓｐｏｎｓｅ，ＵＰＲ）傳感器以及其下游信號(hào)分子時(shí)，可觀察到造模早期ＡＴＦ６α、ｐ－ＰＥＲＫ、ｐ－ＪＮＫ有逐步上升的趨勢，但２１ｄ（即后期）又開始回落，如圖５所示。圖５Ｗｅｓｔｅｒｎ印跡法檢測ＰＨＮ模型大鼠腎小球內(nèi)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及其下游信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)３討論腎小球基底膜足細(xì)胞下出現(xiàn)大量免疫復(fù)合物沉積且基底膜見彌漫性增厚是ＭＮ的主要特征，足細(xì)胞病變是其最突出的表現(xiàn)，故ＭＮ也可視為“足細(xì)胞病”的一種［９］。有研究［１０］顯示，在ＭＮ患者中均可觀察到程度不一的足細(xì)胞病變，包括足細(xì)胞泡變性、腫脹、崩解，足突融合、微融毛化等。由于足細(xì)胞類似于神經(jīng)元，其體內(nèi)分裂繁殖能力不強(qiáng)，故發(fā)生受損時(shí)將難以再生恢復(fù)［１１］。很多文獻(xiàn)［１２］顯示，腎小球硬化很大程度上是足細(xì)胞受損乃至缺失所促使的。本研究發(fā)現(xiàn)，ＰＨＮ模型大鼠在４ｄ起可明顯觀察到足突融合現(xiàn)象，隨時(shí)間延長，足細(xì)胞病變逐步加劇，至２１ｄ可觀察到一系列病變，包括胞體腫脹、足突融合以及微絨毛化等，且該時(shí)間段可見研究對(duì)象組單位腎小球足細(xì)胞絕對(duì)數(shù)目顯著低于對(duì)照組�？梢耘袛啵慵�(xì)胞在ＰＨＮ病變過程中確實(shí)會(huì)發(fā)生損傷乃至
【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2877805