發(fā)布時(shí)間：2020-11-09 20:47

　　 目的探究脂筏在柯薩奇病毒A組16型(CA16)感染RD細(xì)胞中的作用。方法使用膽固醇抑制劑甲基-β-環(huán)糊精(MβCD)驅(qū)散細(xì)胞膜膽固醇并破壞脂筏,分別采用RT-PCR和Western blot技術(shù),在mRNA以及蛋白質(zhì)水平檢測(cè)MβCD處理對(duì)于CA16病毒感染RD細(xì)胞的影響。在RD細(xì)胞感染不同時(shí)間使用MβCD處理,并檢測(cè)其對(duì)CA16病毒感染的影響。MβCD處理后,使用添加外源膽固醇的方式對(duì)細(xì)胞膜膽固醇進(jìn)行補(bǔ)充,觀察CA16病毒感染的變化。通過(guò)Western blot檢測(cè)CA16感染后宿主細(xì)胞Akt磷酸化水平的變化,以及MβCD處理對(duì)宿主細(xì)胞Akt磷酸化的影響。結(jié)果 MβCD以劑量依賴方式抑制CA16病毒對(duì)RD細(xì)胞的感染,MβCD處理濃度為2.5、5、7.5、10 mmol/L時(shí)CA16 VP1的mRNA水平和蛋白質(zhì)水平表達(dá)均出現(xiàn)降低,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在感染前1 h使用MβCD處理CA16 VP1 mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)分別降低了(84.23±3.70)%和(81.80±5.09)%,與未做處理的對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。在MβCD處理后添加200、300、400μg/ml的外源膽固醇,VP1 mRNA水平的表達(dá)恢復(fù)了(26.63±7.69)%、(77.06±6.91)%、(91.36±12.09)%,VP1蛋白質(zhì)水平的表達(dá)恢復(fù)了(28.71±8.27)%、(51.14±5.82)%、(58.14±7.35)%,且VP1表達(dá)與MβCD單獨(dú)處理相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CA16感染30 min時(shí)pAkt表達(dá)上升了(91.86±27.14)%,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CA16感染MβCD預(yù)處理過(guò)的細(xì)胞pAkt未發(fā)生顯著變化(P0.05)。結(jié)論脂筏在CA16病毒感染RD細(xì)胞與激活PI3K/Akt通路中起重要作用。
【部分圖文】：

水平抑制ＣＡ１６病毒的感染。２ＭβＣＤ處理對(duì)ＣＡ１６病毒蛋白質(zhì)水平的影響使用不同濃度的ＭβＣＤ對(duì)ＲＤ細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測(cè)病毒感染２４ｈ后細(xì)胞內(nèi)ＣＡ１６病毒ＶＰ１蛋白表達(dá)，結(jié)果見圖２。隨著ＭβＣＤ預(yù)處理濃度的不斷增加，ＣＡ１６病毒ＶＰ１蛋白呈現(xiàn)劑量依賴性減少，與對(duì)照組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。說(shuō)明ＭβＣＤ的處理可以在蛋白質(zhì)水平抑制ＣＡ１６病毒的感染。圖２ＭβＣＤ在蛋白質(zhì)水平抑制ＣＡ１６病毒Ｆｉｇ．２ＭβＣＤｉｎｈｉｂｉｔＣＡ１６ｉｎｐｒｏｔｅｉｎｌｅｖｅｌ３ＭβＣＤ處理時(shí)間對(duì)ＣＡ１６病毒感染的影響在感染前１ｈ、０ｈ以及感染后１ｈ分別用１０ｍｍｏｌ／ＬＭβＣＤ對(duì)ＲＤ細(xì)胞進(jìn)行處理，２４ｈ后分別采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ檢測(cè)病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制，結(jié)果見圖３。感染前１ｈ、０ｈ以及感染后１ｈ處理組與對(duì)照組相比，ＶＰ１ｍＲＮＡ水平表達(dá)分別降低了（８４．２３±３．７０）％、（３４．４０±１０．６１）％、（６４．６７±６．７０）％，蛋白質(zhì)水平的表達(dá)分別降低了（８１．８０±５．０９）％、（２４．４０±９．６１）％、（４４．６７±６．８８）％。在感染前１ｈ用ＭβＣＤ處理細(xì)胞對(duì)ＣＡ１６病毒的感染抑制效果尤為明顯，與未用藥物處理的對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＜０．０５）。說(shuō)明ＭβＣＤ對(duì)ＣＡ１６病毒的抑制主要體現(xiàn)在抑制病毒的入侵。·
【相似文獻(xiàn)】

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