研究背景 β－內(nèi)酰胺類藥物是治療革蘭陰性桿菌感染的最主要藥物，革蘭陰性桿菌對β－內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要原因是產(chǎn)生了分解β－內(nèi)酰胺環(huán)的β－內(nèi)酰胺酶 。超廣譜β－內(nèi)酰胺酶（Extended-spectrum β-lactamases ESBLs）主要由TEM-1 、TEM-2和SHV-1型廣譜β－內(nèi)酰胺酶經(jīng)幾個氨基酸點突變而來，能水解包括第三代頭孢菌素在內(nèi)的β－內(nèi)酰胺類藥物，不水解頭霉類、碳青霉烯類抗生素，其活性可被克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦等酶抑制劑抑制。最近30年來，由于第三代頭孢菌素的大量使用，產(chǎn) ESBLs的革蘭陰性桿菌越來越多。到目前為止，檢出的ESBLs有100余種。除了TEM型和SHV型ESBLs外，還有CTX-M型、PER型 、VEB 型等ESBLs。ESBLs主要由肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌產(chǎn)生，但近年來在其他腸桿菌科細菌以及非發(fā)酵菌中的ESBLs檢出率也有增長趨勢，產(chǎn)ESBLs革蘭陰性桿菌呈多重耐藥性。PER－1型ESBLs是非TEM型和非SHV型ESBLs，最早在銅綠假單胞菌中檢出，且主要在歐洲的地中海國家。近年來在沙門菌屬、不動桿菌屬、奇異變形桿菌、肺炎克雷伯菌等細菌中也檢出PER－1型ESBLs。在韓國和我國也有報道，但PER－1型ESBLs在腸桿菌科的流行情況還不清楚，非常有必要對產(chǎn)PER-1型ESBLs腸桿菌科細菌進行研究。目的　研究南昌地區(qū)大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌產(chǎn)ESBLs情況及耐藥譜；檢測三種細菌產(chǎn)PER－1型ESBLs的情況以及產(chǎn)PER－1型ESBLs菌株的耐藥特點；調(diào)查是否有產(chǎn)PER－1型ESBLs菌株引起的院內(nèi)感染發(fā)生。方法　收集2002年8月至2003年6月間從南昌地區(qū)四家醫(yī)院分離的167株大腸埃希菌、154株肺炎克雷伯菌和67株陰溝腸桿菌，用頭孢噻肟（Cefotaxime CTX ）或頭孢他啶（Ceftaxidime CAZ）藥敏紙片篩選產(chǎn)ESBLs可疑株；用頭孢噻肟（Cefotaxime CTX）和頭孢噻肟加克拉維酸（Cefotaxime /Clavulanic Acid CTX/CA）或頭孢他啶（Ceftaxidime CAZ）和頭孢他啶加克拉維酸（Ceftaxidime/ Clavulanic Acid CAZ/CA ）雙紙片擴散法檢測ESBLs，；采用 K－B法進行藥敏試驗、PCR擴增PER-1基因，對PER-1基因擴增陽性的菌株用改良三相試驗進行ESBLs的確證，對PER-1 WP=4 基因擴增陽性的PCR原液進行DNA測序；用腸桿菌科菌屬間的重復(fù)序列(entrobacter repetitive intergenic concescus ERIC)作為引物擴增PER-1基因陽性的菌株進行基因分型。結(jié)果 符合 CTX篩選標準的有158株，符合CAZ篩選標準的有94株，兩者都符合的有76株，共176株產(chǎn)ESBLs可疑株。CTX 和CTX/CA雙紙片檢出115株陽性，CAZ和 CAZ/CA雙紙片檢出62株陽性，兩種雙紙片法都為陽性的有51株，共檢出126株產(chǎn)ESBLs菌株。大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌的ESBLs檢出率分別為30%（50/167）、34%（52/156）和36%（24/67）。產(chǎn)ESBLs株對氨芐西林、阿齊霉素和克林霉素的耐藥率近乎100%, 對阿米卡星、環(huán)丙沙星和呋喃妥因的耐藥相對較低，除2株產(chǎn)ESBLs肺克雷伯菌耐亞胺培南外，其余均為敏感。PER-1基因擴增陽性共16株，其中大腸埃希菌6株、肺炎克雷伯菌5株、陰溝腸桿菌5株，PER-1基因陽性率分別為 3.6%(6/16７)、3.2%(5/156)和9.0%(5/67)，經(jīng)測序PCR產(chǎn)物片段為579bp，與PAPER-1的594-1172bp之間的579bp符合率為100%。16株P(guān)ER-1陽性的菌株改良三相試驗結(jié)果為14株單產(chǎn)ESBLs，2株為同時產(chǎn)ESBLs和AmpC酶，一株為肺炎克雷伯菌，另一株為陰溝腸桿菌。PER-1基因陽性株對頭孢他啶、頭孢噻肟耐藥率為100%，頭孢西丁耐藥率也達94%，對阿米卡星和頭孢吡肟的耐藥率較低，分別為56%和31%，對亞胺培南的耐藥率為0。ERIC2引物擴增6株產(chǎn)PER-1型ESBLs大腸埃希菌結(jié)果為5個基因型，兩株菌的DNA條帶完全相同且表型耐藥譜也相似，而5株陰溝腸桿菌有５個基因型。結(jié)論　　南昌地區(qū)大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌和陰溝腸桿菌的產(chǎn)ESBLs率較高，耐藥性嚴重。篩選產(chǎn)ESBLs可疑株的最佳紙片為 CTX，表型確證產(chǎn)ESBLs菌株的最佳雙紙片為CTX和 CTX/CA。陰溝腸桿菌的產(chǎn)ESBLs率超過肺炎克伯菌成為主要產(chǎn)ESBLs菌。PER-1基因已在腸桿菌科細菌中播散，陰溝腸桿菌為首次檢出PER-1基因。治療產(chǎn)PER-1型ESBLs菌株引起的感染可選用亞胺培南或阿米卡星。改良三維試驗可用于檢測同時產(chǎn)ESBLs和AmpC酶的菌株。ERIC-PCR是簡便的、可用于多重耐藥菌株流行病學(xué)調(diào)查的方法。未發(fā)現(xiàn)產(chǎn)PER-1型ESBLs菌株造成的院內(nèi)感染。
【學(xué)位單位】：江西醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R378
【文章目錄】：
一、 中文摘要
二、 英文摘要
三、 前言
四、 材料與方法
五、 結(jié)果
六、 討論
七、 結(jié)論
八、 參考文獻
九、 致謝
十、 附錄

【參考文獻】

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本文編號：2873206