本研究從活化血小板免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞中分別克隆出小鼠免疫球蛋白的重、輕鏈可變區(qū)(V_H和V_L)基因，將V_H和V_L在體外拼接成單鏈抗體(ScFv)基因后轉(zhuǎn)入噬菌體載體，使單鏈抗體分子展示在噬菌體表面，從而成功構(gòu)建了抗血小板表面受體全套單鏈抗體噬菌體展示文庫。以血小板膜表面數(shù)種受體糖蛋白(GP)Ⅱb、Ⅲa、Ⅱb／Ⅲa復(fù)合物及重組凝血酶受體PAR-1(rPAR1)為靶抗原從該文庫中篩選各自的特異性單鏈抗體。靶抗原GPⅡb、GPⅢa、GPⅡb／Ⅲa以親合層析方法從血小板裂解液中提取，rPAR1以重組蛋白的形式在大腸桿菌中表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物具有與天然PAR-1分子相似的活性和功能。 從文庫中篩選出的單鏈抗體克隆經(jīng)測序證實符合抗體可變區(qū)結(jié)構(gòu)特點，對其中抗rPAR1的單鏈抗體克隆APAR31進(jìn)行了表達(dá)，得到了有抗原結(jié)合能力的單鏈抗體分子，同時也證實了所建噬菌體文庫的有效性。上述工作為噬菌體展示技術(shù)在血栓與止血領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R392.1
【部分圖文】：

6KDaa，rPAR圖5rPARIb.cleavedPePtidese.Proteinmarker經(jīng)凝血酶酶切后15%SDS一隊GE尿素膠電泳3.凝血酶酶切片斷誘導(dǎo)血小板聚集試驗?zāi)该盖泻蟮陌寰奂�，�?dāng)濃度為sng/mL時出現(xiàn)血小板變形波，濃度40ng/mL集率65%(圖6)。未酶切的rPARI不能誘導(dǎo)血小板聚集。1能誘導(dǎo)血小時達(dá)到最大聚
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本文編號：2871041