發(fā)布時(shí)間：2020-11-05 07:56

　　 目的研究小鼠急性腦缺血再灌注(MCAO)損傷后消化道不同腸段的通透性改變情況。方法 72只小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=18)、假手術(shù)組(n=18)和腦缺血再灌注組(MCAO組,n=36)。采用線(xiàn)栓法制備小鼠MCAO損傷模型,腦組織TTC染色驗(yàn)證模型是否成功并計(jì)算梗死面積,采用異硫氰酸熒光標(biāo)記的右旋糖酐(FD4)法檢測(cè)術(shù)后1、2、3d腸道通透性變化,并于術(shù)后2d檢測(cè)小鼠遠(yuǎn)端小腸、盲腸和結(jié)腸的腸道通透性,HE染色法及透射電子顯微鏡(TEM)觀察小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)及超微結(jié)構(gòu)的變化。結(jié)果 TTC染色可觀察到明顯的腦梗死部位,表明MCAO模型制備成功。FD4法檢測(cè)腸道通透性顯示MCAO組小鼠術(shù)后1、2、3d的血漿FD4濃度均高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);MCAO組小鼠血漿FD4濃度與腦梗死面積百分比呈明顯正相關(guān)(r=0.734,P0.001);MCAO組小鼠遠(yuǎn)端小腸、盲腸和結(jié)腸的血漿FD4濃度均高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組[分別為(18.53±3.92)mg/L vs.(5.01±2.25)mg/L、(6.27±2.37)mg/L,(3.00±0.87)mg/L vs.(0.71±0.18)mg/L、(0.76±0.22)mg/L,(10.38±4.73)mg/L vs.(1.66±0.47)mg/L、(2.54±0.67)mg/L],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),而正常對(duì)照組與假手術(shù)組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);結(jié)腸段MCAO組血漿FD4濃度約為同腸段假手術(shù)組的4.1倍,高于其他兩個(gè)腸段的增高幅度(盲腸3.9倍;小腸遠(yuǎn)端3.0倍)。病理學(xué)觀察可見(jiàn)MCAO小鼠結(jié)腸上皮損傷及絨毛不規(guī)則,并有炎性細(xì)胞浸潤(rùn),透射電鏡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)結(jié)腸黏膜上皮緊密連接疏松且間隙增寬。結(jié)論小鼠MCAO損傷后各腸段通透性均不同程度增加,尤以結(jié)腸改變最為顯著。
【部分圖文】：

，進(jìn)一步兩兩比較采用Tukey多重比較方法；相關(guān)性分析采用Pearson方法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1小鼠急性MCAO模型建立正常對(duì)照組與假手術(shù)組中正常無(wú)缺血腦組織經(jīng)TTC染色后呈鮮紅色，MCAO組腦梗死部位組織呈蒼白色(圖1A)。采用軟件通過(guò)顏色差異計(jì)算梗死面積(圖1B)。MCAO組小鼠術(shù)后2、3d的腦梗死面積[分別為(31.40±2.41)%、(31.13±4.05)%]明顯大于術(shù)后1d[(23.75±2.50)%]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，術(shù)后2d和3d的梗死面積無(wú)明顯差異(P>0.05)。2.23組小鼠術(shù)后不同時(shí)間腸道通透性檢測(cè)結(jié)果圖1小鼠腦組織TTC染色結(jié)果Fig.1TTCstainingofmousebraintissuesA.腦組織TTC染色；B.TTC染色計(jì)算梗死面積；MCAO.腦缺血再灌注表1不同時(shí)間點(diǎn)3組小鼠血漿FD4濃度比較(mg/L，x±s)Tab.1FD4concentrationsinthreegroupsofmouseatdifferenttimepoints(mg/L,x±s)組別術(shù)后1d術(shù)后2d術(shù)后3d正常對(duì)照組(n=3)1.68±0.261.26±0.761.82±1.19假手術(shù)組(n=3)4.27±0.132.53±0.393.15±0.57MCAO組(n=6)8.71±3.17(1)(2)11.32±3.91(1)(2)9.96±5.37(1)(2)F17.98027.3109.211P<0.001<0.0010.003MCAO.腦缺血再灌注；與正常對(duì)照組比較，(1)P<0.05；與假手術(shù)組比較，(2)P<0.05。正常對(duì)照組假手術(shù)組MCAO組TTC染色梗死面積總面積ABMCAO組小鼠術(shù)后1、2、3d的血漿FD4濃度均高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；MCAO組小鼠血漿FD4濃度與腦梗死面積百分比呈明顯正相關(guān)(r=0.734，P<0.001，表1)。2.33組小鼠不同腸段通透性檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。MCAO組小鼠遠(yuǎn)端小腸、盲腸、結(jié)腸的血漿FD4濃度均高于正常對(duì)照組和假手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，正常對(duì)照組與假手術(shù)組比較

學(xué)屏障[9]。腸道上皮細(xì)胞構(gòu)表2小鼠不同腸段通透性比較(mg/L，x±s)Tab.2Comparisonofpermeabilityindifferentintestinalsegmentsofmouse(mg/L,x±s)組別遠(yuǎn)端小腸盲腸結(jié)腸正常對(duì)照組(n=3)5.01±2.250.71±0.181.66±0.47假手術(shù)組(n=3)6.27±2.370.76±0.222.54±0.67MCAO組(n=6)18.53±3.92(1)(2)3.00±0.87(1)(2)10.38±4.73(1)(2)F32.15014.67012.610P<0.001<0.001<0.001MCAO.腦缺血再灌注；與正常對(duì)照組比較，(1)P<0.05；與假手術(shù)組比較，(2)P<0.05。圖2光鏡及電鏡觀察小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)改變及腸上皮緊密連接超微結(jié)構(gòu)改變Fig.2Histopathologicalandultrastructuralchangesofmousecolontissuesandthetightjunctionsofintestinalepithelium(HEstainingandtransmissionelectronmicroscope)MCAO.腦缺血再灌注；箭頭示腸道上皮間連接復(fù)合體成腸道組織屏障，上皮間可以通過(guò)某些特定分子量物質(zhì)的特性被認(rèn)為是腸道特有的通透性，已有研究證實(shí)多種非腸道疾病后腸道通透性均有不同程度的改變[10]。腸道通透性改變后，腸道內(nèi)外物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)發(fā)生異常，可能參與了疾病發(fā)生發(fā)展的過(guò)程。近年來(lái)大量研究也證實(shí)，疾病狀態(tài)下腸道內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡，腸道菌群紊亂，參與了多種疾病的發(fā)生發(fā)展，既有消化系統(tǒng)疾病(如結(jié)腸炎[11-12])，也有非消化系統(tǒng)疾病(如動(dòng)脈粥樣硬化[13-14]、肥胖[15-16]、代謝性疾病[17]及心腦血管疾病[18-19]等)。腦-腸軸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)與胃腸道功能相互作用的雙向調(diào)節(jié)軸[20-21]，可通過(guò)激活腸道免疫活動(dòng)進(jìn)而改變腸道菌群結(jié)構(gòu)，有研究發(fā)現(xiàn)在應(yīng)激狀態(tài)下(如腦卒中等)肥大細(xì)胞被激活，腸道上皮緊密連接蛋白的表達(dá)量?
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