發(fā)布時間：2020-11-05 00:53

　　 目的觀察神經(jīng)生長因子(NGF)對四氯化碳(CCl4)誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化的影響,并初步探討其在抗肝纖維化中的作用機(jī)制。方法用CCl4誘導(dǎo)形成小鼠肝纖維化模型。將30只雌性昆明小鼠隨機(jī)分成A、B、C3組,每組10只。A、B組均予CCl4皮下注射纖維化模型,B組加予NGF干預(yù);C組以等量生理鹽水代替CCl4皮下注射。8周時采集標(biāo)本,用全自動生化分析儀檢測ALT、AST、TBIL、Alb;放射免疫法檢測肝纖維化指標(biāo)透明質(zhì)酸(HA)、層粘連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PCⅢ)。肉眼及組織病理形態(tài)學(xué)法(常規(guī)HE染色、網(wǎng)狀纖維染色及Masson染色)觀察肝組織標(biāo)本,并采用Ishaki評分系統(tǒng)對小鼠肝組織炎癥活動度及纖維化程度進(jìn)行評分。半定量RTPCR分析Bax基因在小鼠肝組織中的表達(dá)情況。結(jié)果成功建立小鼠肝纖維化模型,表現(xiàn)為匯管區(qū)周圍纖維化明顯,有芒狀纖維和纖維間隔形成。A、B組ALT、AST、HA、LN均明顯高于C組(P0.05);B組ALT、AST、LN均明顯低于A組(P0.05)。HE染色、網(wǎng)狀纖維染色及Masson染色顯示,A組肝組織炎癥及纖維化程度最明顯,B組肝組織炎癥較A組顯著減輕,未形成纖維間隔,纖維組織細(xì)短,C組肝組織未見明顯炎癥細(xì)胞浸潤及纖維形成。3組炎癥活動度得分、纖維化得分差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(HC=12.09,P0.05;HC=17.95,P0.05)。RT-PCR結(jié)果示:A、B、C 3組之間Bax/β-actin相對吸光度比值分別為0.677±0.193、1.234±0.027、1.525±0.037,各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2 227.16,P0.05)。結(jié)論 NGF可以阻斷CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化,減輕肝組織炎癥;其抗纖維作用與減輕肝組織炎癥及上調(diào)Bax基因的表達(dá)相關(guān)。
【部分圖文】：

圖1各組8周時肝組織病理表現(xiàn)(×100)表4各組肝臟炎癥活動度評分情況只組別0～3分4～6分7～9分10～14分15～18分A組00361B組02530C組73000表5各組肝臟纖維化評分情況只組別01分2分3分4分5分6分A組0002242B組0016210C組7300000M:Marker;1:C組;2:B組;3:A組圖2各組肝組織中BaxmＲNA的表達(dá)結(jié)締組織增生，逐漸形成肝纖維化［8］。然而，肝纖維化可進(jìn)展為肝硬化，甚至肝癌，直接威脅到肝病患者的生命。如能阻斷或逆轉(zhuǎn)肝纖維化，就可減少嚴(yán)重后果的發(fā)生，這是肝病治療的關(guān)鍵，也是目前國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。NGF作為一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，在神經(jīng)系統(tǒng)的中的應(yīng)用已經(jīng)很成熟了。近年來，NGF在肝臟疾病中的作用亦嶄露頭角。一方面，肝損傷時，肝細(xì)胞可表達(dá)NGF，而NGF可抑制核轉(zhuǎn)錄因子－κB(NF－κB)的激活，減少促炎因子的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制肝臟炎癥反應(yīng)，減緩肝纖維化的進(jìn)展［9］。另一方面，NGF與肝纖維化密切相關(guān)，特別是對肝纖維化的中心環(huán)節(jié)，即HSC的活化及增殖，其在肝纖維化中扮演重要的角色。NGF可抑制HSC的增殖，作用機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)凋亡來調(diào)節(jié)HSC的數(shù)量［10］。另外，NGF可抑制HSC合成Ⅰ、Ⅲ型膠原，誘導(dǎo)HSC凋亡，抑制HSC膠原分泌，可能是NGF抗肝纖維化的作用機(jī)制［11］。學(xué)者們通過體外實(shí)驗(yàn)逐漸認(rèn)識到NGF在抗肝纖維化中的作用，為此本課題就NGF與抗肝纖維化作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)效果進(jìn)行了深入研究。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)8周后，3組間生化指標(biāo)·3644·廣東醫(yī)學(xué)2014年12月第35卷第23期GuangdongMedicalJournalDec．2014，Vol．35，No．23

圖1各組8周時肝組織病理表現(xiàn)(×100)表4各組肝臟炎癥活動度評分情況只組別0～3分4～6分7～9分10～14分15～18分A組00361B組02530C組73000表5各組肝臟纖維化評分情況只組別01分2分3分4分5分6分A組0002242B組0016210C組7300000M:Marker;1:C組;2:B組;3:A組圖2各組肝組織中BaxmＲNA的表達(dá)結(jié)締組織增生，逐漸形成肝纖維化［8］。然而，肝纖維化可進(jìn)展為肝硬化，甚至肝癌，直接威脅到肝病患者的生命。如能阻斷或逆轉(zhuǎn)肝纖維化，就可減少嚴(yán)重后果的發(fā)生，這是肝病治療的關(guān)鍵，也是目前國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。NGF作為一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，在神經(jīng)系統(tǒng)的中的應(yīng)用已經(jīng)很成熟了。近年來，NGF在肝臟疾病中的作用亦嶄露頭角。一方面，肝損傷時，肝細(xì)胞可表達(dá)NGF，而NGF可抑制核轉(zhuǎn)錄因子－κB(NF－κB)的激活，減少促炎因子的產(chǎn)生，進(jìn)而抑制肝臟炎癥反應(yīng)，減緩肝纖維化的進(jìn)展［9］。另一方面，NGF與肝纖維化密切相關(guān)，特別是對肝纖維化的中心環(huán)節(jié)，即HSC的活化及增殖，其在肝纖維化中扮演重要的角色。NGF可抑制HSC的增殖，作用機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)凋亡來調(diào)節(jié)HSC的數(shù)量［10］。另外，NGF可抑制HSC合成Ⅰ、Ⅲ型膠原，誘導(dǎo)HSC凋亡，抑制HSC膠原分泌，可能是NGF抗肝纖維化的作用機(jī)制［11］。學(xué)者們通過體外實(shí)驗(yàn)逐漸認(rèn)識到NGF在抗肝纖維化中的作用，為此本課題就NGF與抗肝纖維化作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)效果進(jìn)行了深入研究。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)8周后，3組間生化指標(biāo)·3644·廣東醫(yī)學(xué)2014年12月第35卷第23期GuangdongMedicalJournalDec．2014，Vol．35，No．23
【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號：2870864