目的:采用成像毛細(xì)管等電聚焦電泳(imaging capillary electrofocusing electrophoresis,iCIEF)分析單抗的電荷異質(zhì)性,組織國(guó)內(nèi)多家質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室對(duì)該方法進(jìn)行驗(yàn)證;制備用于iCIEF法的系統(tǒng)適用性對(duì)照品。方法:邀請(qǐng)19個(gè)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室,應(yīng)用3種品牌(4種型號(hào))的iCIEF設(shè)備進(jìn)行方法學(xué)的預(yù)驗(yàn)證,確定該方法的關(guān)鍵試劑、儀器參數(shù)設(shè)置、數(shù)據(jù)分析要點(diǎn)等;依據(jù)ICH_Q2_R1指導(dǎo)原則、2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》(簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》)通則9101制定方法學(xué)驗(yàn)證方案,邀請(qǐng)11個(gè)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室參加驗(yàn)證;制備基于iCIEF法的系統(tǒng)適用性對(duì)照品并利用SEC-HPLC、IEC-HPLC、非還原CE-SDS進(jìn)行穩(wěn)定性評(píng)價(jià)。結(jié)果:預(yù)驗(yàn)證結(jié)果顯示:等電點(diǎn)標(biāo)記物(pI Marker)為關(guān)鍵試劑;不同品牌、型號(hào)的iCIEF檢測(cè)設(shè)備參數(shù)設(shè)置無(wú)需統(tǒng)一;數(shù)據(jù)處理可采用自動(dòng)積分、手動(dòng)積分相結(jié)合的形式。驗(yàn)證結(jié)果:完成了該方法的特異性、準(zhǔn)確度、精密度、線性及其范圍、耐用性、定量下限的評(píng)價(jià);制備了iCIEF法的系統(tǒng)適用性對(duì)照品,并進(jìn)行了加速及長(zhǎng)期穩(wěn)定性評(píng)價(jià),制定了相應(yīng)的合格標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)論:首次組織了iCIEF的方法學(xué)驗(yàn)證,為《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)提高提供方法學(xué)驗(yàn)證依據(jù),為該方法制備了系統(tǒng)適用性對(duì)照品。
【文章目錄】：
1 單抗試劑與儀器設(shè)備
    1.1 單抗及主要試劑
    1.2 儀器耗材
2 方法與結(jié)果
    2.1 iCIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的建立
        2.1.1 建立iCIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品
        2.1.2 SEC-HPLC評(píng)價(jià)i CIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的穩(wěn)定性
            2.1.2. 1 測(cè)定參數(shù)設(shè)置
            2.1.2. 2 供試品處理
            2.1.2. 3 SEC-HPLC評(píng)價(jià)iCIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的穩(wěn)定性結(jié)果
        2.1.3 利用IEC-HPLC評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)iCIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的穩(wěn)定性
            2.1.3. 1 測(cè)定參數(shù)設(shè)置
            2.1.3. 2 供試品處理
            2.1.3. 3 IEC-HPLC評(píng)價(jià)iCIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的穩(wěn)定性結(jié)果
        2.1.4 利用非還原CE-SDS評(píng)價(jià)iCIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的穩(wěn)定性
            2.1.4. 1 毛細(xì)管及儀器參數(shù)設(shè)置
            2.1.4. 2 供試品處理
            2.1.4. 3 非還原CE-SDS評(píng)價(jià)i CIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的穩(wěn)定性結(jié)果
    2.2 iCIEF分析單抗電荷異質(zhì)性的方法學(xué)預(yù)驗(yàn)證 （19個(gè)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室, 22臺(tái)iCIEF設(shè)備）
        2.2.1 方法學(xué)預(yù)驗(yàn)證樣品檢測(cè)
            2.2.1. 1 供試品預(yù)稀釋
            2.2.1. 2 供試品檢測(cè)
            2.2.1. 3 方法學(xué)預(yù)驗(yàn)證結(jié)果
    2.3 iCIEF分析單抗電荷異質(zhì)性的方法學(xué)聯(lián)合驗(yàn)證 （11個(gè)質(zhì)控實(shí)驗(yàn)室, 14臺(tái)iCIEF設(shè)備）
        2.3.1 特異性
        2.3.2 準(zhǔn)確度
        2.3.3 精密度
            2.3.3. 1 重復(fù)性檢測(cè)
            2.3.3. 2 中間精密度檢測(cè)
        2.3.4 定量下限 （LOQ）
        2.3.5 耐用性
            2.3.5. 1 供試品溶液完成制備后在4℃條件下保存時(shí)間的耐用性
            2.3.5. 2 Pharmalyte 3-10終濃度分別在3%、4% （目標(biāo)終濃度） 、5%的耐用性
            2.3.5. 3 Methyl Cellulose終濃度分別在0.25%、0.35% （目標(biāo)終濃度） 、0.45%的耐用性
        2.3.6 線性和范圍
    2.4 iCIEF系統(tǒng)適用性對(duì)照品的可接受標(biāo)準(zhǔn)建立
3 討論

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 于傳飛;郭瑋;王蘭;張峰;劉春雨;王文波;李萌;王軍志;高凱;;成像毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦電泳法對(duì)單克隆抗體制品的電荷異質(zhì)性分析[J];藥物分析雜志;2014年07期

2 王麗;周勇;王軍志;;成像毛細(xì)管等電聚焦電泳分析糖蛋白類生物技術(shù)藥物[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2012年08期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 于傳飛;郭瑋;王蘭;張峰;劉春雨;王文波;李萌;王軍志;高凱;;成像毛細(xì)管等點(diǎn)聚焦電泳法對(duì)單克隆抗體制品的電荷異質(zhì)性分析[J];藥物分析雜志;2014年07期

2 楊靖;孫衛(wèi)兵;鄺玉;;抗體的系統(tǒng)性檢測(cè)方法[J];四川生理科學(xué)雜志;2013年03期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王麗;周勇;王軍志;;成像毛細(xì)管等電聚焦電泳分析糖蛋白類生物技術(shù)藥物[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2012年08期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 武剛;于傳飛;王文波;李萌;王蘭;;成像毛細(xì)管等電聚焦電泳分析單克隆抗體電荷異質(zhì)性的方法學(xué)驗(yàn)證及系統(tǒng)適用性對(duì)照品的制備[J];藥物分析雜志;2019年01期

2 余燕;鄧鋒;蔣忠軍;;生化藥物中豬、牛與羊性成分PCR檢測(cè)的陽(yáng)性對(duì)照品的構(gòu)建[J];中國(guó)藥師;2015年09期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 何睦;人源化抗CD20單克隆抗體理化性質(zhì)和初步結(jié)晶研究[D];吉林大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2869691