目的:采用成像毛細管等電聚焦電泳(imaging capillary electrofocusing electrophoresis,iCIEF)分析單抗的電荷異質(zhì)性,組織國內(nèi)多家質(zhì)控實驗室對該方法進行驗證;制備用于iCIEF法的系統(tǒng)適用性對照品。方法:邀請19個質(zhì)控實驗室,應(yīng)用3種品牌(4種型號)的iCIEF設(shè)備進行方法學(xué)的預(yù)驗證,確定該方法的關(guān)鍵試劑、儀器參數(shù)設(shè)置、數(shù)據(jù)分析要點等;依據(jù)ICH_Q2_R1指導(dǎo)原則、2015年版《中華人民共和國藥典》(簡稱《中國藥典》)通則9101制定方法學(xué)驗證方案,邀請11個質(zhì)控實驗室參加驗證;制備基于iCIEF法的系統(tǒng)適用性對照品并利用SEC-HPLC、IEC-HPLC、非還原CE-SDS進行穩(wěn)定性評價。結(jié)果:預(yù)驗證結(jié)果顯示:等電點標記物(pI Marker)為關(guān)鍵試劑;不同品牌、型號的iCIEF檢測設(shè)備參數(shù)設(shè)置無需統(tǒng)一;數(shù)據(jù)處理可采用自動積分、手動積分相結(jié)合的形式。驗證結(jié)果:完成了該方法的特異性、準確度、精密度、線性及其范圍、耐用性、定量下限的評價;制備了iCIEF法的系統(tǒng)適用性對照品,并進行了加速及長期穩(wěn)定性評價,制定了相應(yīng)的合格標準。結(jié)論:首次組織了iCIEF的方法學(xué)驗證,為《中國藥典》標準提高提供方法學(xué)驗證依據(jù),為該方法制備了系統(tǒng)適用性對照品。
【文章目錄】：
1 單抗試劑與儀器設(shè)備
    1.1 單抗及主要試劑
    1.2 儀器耗材
2 方法與結(jié)果
    2.1 iCIEF系統(tǒng)適用性對照品的建立
        2.1.1 建立iCIEF系統(tǒng)適用性對照品
        2.1.2 SEC-HPLC評價i CIEF系統(tǒng)適用性對照品的穩(wěn)定性
            2.1.2. 1 測定參數(shù)設(shè)置
            2.1.2. 2 供試品處理
            2.1.2. 3 SEC-HPLC評價iCIEF系統(tǒng)適用性對照品的穩(wěn)定性結(jié)果
        2.1.3 利用IEC-HPLC評價評價iCIEF系統(tǒng)適用性對照品的穩(wěn)定性
            2.1.3. 1 測定參數(shù)設(shè)置
            2.1.3. 2 供試品處理
            2.1.3. 3 IEC-HPLC評價iCIEF系統(tǒng)適用性對照品的穩(wěn)定性結(jié)果
        2.1.4 利用非還原CE-SDS評價iCIEF系統(tǒng)適用性對照品的穩(wěn)定性
            2.1.4. 1 毛細管及儀器參數(shù)設(shè)置
            2.1.4. 2 供試品處理
            2.1.4. 3 非還原CE-SDS評價i CIEF系統(tǒng)適用性對照品的穩(wěn)定性結(jié)果
    2.2 iCIEF分析單抗電荷異質(zhì)性的方法學(xué)預(yù)驗證 （19個質(zhì)控實驗室, 22臺iCIEF設(shè)備）
        2.2.1 方法學(xué)預(yù)驗證樣品檢測
            2.2.1. 1 供試品預(yù)稀釋
            2.2.1. 2 供試品檢測
            2.2.1. 3 方法學(xué)預(yù)驗證結(jié)果
    2.3 iCIEF分析單抗電荷異質(zhì)性的方法學(xué)聯(lián)合驗證 （11個質(zhì)控實驗室, 14臺iCIEF設(shè)備）
        2.3.1 特異性
        2.3.2 準確度
        2.3.3 精密度
            2.3.3. 1 重復(fù)性檢測
            2.3.3. 2 中間精密度檢測
        2.3.4 定量下限 （LOQ）
        2.3.5 耐用性
            2.3.5. 1 供試品溶液完成制備后在4℃條件下保存時間的耐用性
            2.3.5. 2 Pharmalyte 3-10終濃度分別在3%、4% （目標終濃度） 、5%的耐用性
            2.3.5. 3 Methyl Cellulose終濃度分別在0.25%、0.35% （目標終濃度） 、0.45%的耐用性
        2.3.6 線性和范圍
    2.4 iCIEF系統(tǒng)適用性對照品的可接受標準建立
3 討論

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 于傳飛;郭瑋;王蘭;張峰;劉春雨;王文波;李萌;王軍志;高凱;;成像毛細管等點聚焦電泳法對單克隆抗體制品的電荷異質(zhì)性分析[J];藥物分析雜志;2014年07期

2 王麗;周勇;王軍志;;成像毛細管等電聚焦電泳分析糖蛋白類生物技術(shù)藥物[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年08期

【共引文獻】

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1 于傳飛;郭瑋;王蘭;張峰;劉春雨;王文波;李萌;王軍志;高凱;;成像毛細管等點聚焦電泳法對單克隆抗體制品的電荷異質(zhì)性分析[J];藥物分析雜志;2014年07期

2 楊靖;孫衛(wèi)兵;鄺玉;;抗體的系統(tǒng)性檢測方法[J];四川生理科學(xué)雜志;2013年03期

【二級參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王麗;周勇;王軍志;;成像毛細管等電聚焦電泳分析糖蛋白類生物技術(shù)藥物[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年08期

【相似文獻】

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1 武剛;于傳飛;王文波;李萌;王蘭;;成像毛細管等電聚焦電泳分析單克隆抗體電荷異質(zhì)性的方法學(xué)驗證及系統(tǒng)適用性對照品的制備[J];藥物分析雜志;2019年01期

2 余燕;鄧鋒;蔣忠軍;;生化藥物中豬、牛與羊性成分PCR檢測的陽性對照品的構(gòu)建[J];中國藥師;2015年09期

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1 何睦;人源化抗CD20單克隆抗體理化性質(zhì)和初步結(jié)晶研究[D];吉林大學(xué);2014年

本文編號：2869691