目的:研究重組人白介素-13(recombinant human interleukine-13,rhIL-13)介導(dǎo)原癌基因c-fos表達(dá)及其對(duì)巨核細(xì)胞系白血病Dami細(xì)胞株分化的影響。為IL-13的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和奠定理論基礎(chǔ)。方法:1.細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn):(1)繪制Dami細(xì)胞生長(zhǎng)曲線圖;(2)MTT法測(cè)定對(duì)照組和rhIL-13組細(xì)胞吸光度值(A值),觀察rIL-13對(duì)Dami細(xì)胞增殖的影響。 2.總RNA提取:取生長(zhǎng)良好的Dami細(xì)胞1×109/L,經(jīng)過20小時(shí)的血清饑餓后,以rhIL-13分別誘導(dǎo)30、60分鐘和作用5代后,提取細(xì)胞總RNA,通過RNA電泳判斷其是否符合實(shí)驗(yàn)要求。 3. RT-PCR:(1)檢測(cè)Dami細(xì)胞IL-13受體α1(IL-13Rα1)的表達(dá);(2)觀察在rhIL-13分別誘導(dǎo)30、60分鐘后,c-fos mRNA表達(dá)水平;(3)以 rhIL-13作用于Dami細(xì)胞并分傳5代,檢測(cè)Dami細(xì)胞上的表面標(biāo)志物GPIIb及Glycophorin A(GPA) 的mRNA表達(dá)。 4.Western Blotting:取生長(zhǎng)良好的Dami細(xì)胞,經(jīng)過20小時(shí)的血清饑餓后, rhIL-13誘導(dǎo)30分鐘,細(xì)胞以RIPA緩沖液裂解, Western Blotting檢測(cè)Dami細(xì)胞的c-fos蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:1. RT-PCR 結(jié)果顯示,Dami細(xì)胞表達(dá)IL-13 Rα1。 2.rhIL-13誘導(dǎo)Dami細(xì)胞30分鐘后,除空白對(duì)照組外,rhIL-13組、血清組(15%)和混合組(rhIL-13+血清)原癌基因c-fos的mRNA表達(dá)均增高,60分鐘后,除血清組外,rhIL-13組和混合組c-fos mRNA表達(dá)均消失。 3.rhIL-13誘導(dǎo)Dami細(xì)胞5代后,Dami細(xì)胞的巨核細(xì)胞系表面標(biāo)志物GPIIbmRNA表達(dá)增加。 4. rhIL-13誘導(dǎo)Dami細(xì)胞5代后,Dami細(xì)胞GPA mRNA表達(dá)增加。 5. rhIL-13誘導(dǎo)Dami細(xì)胞30分鐘后,與空白對(duì)照組相比,rhIL-13 WP=4 組、血清組和混合組c-fos的蛋白表達(dá)明顯增加。 6. MTT試驗(yàn)結(jié)果表明,rhIL-13組與對(duì)照組相比,其吸光度值無明顯差異,rhIL-13對(duì)Dami細(xì)胞的增殖無顯著性影響(P0.05)。結(jié)論:1. Dami細(xì)胞表達(dá)IL-13受體α1。2.rhIL-13誘導(dǎo)Dami細(xì)胞原癌基因c-fos表達(dá)。3.rhIL-13上調(diào)Dami細(xì)胞表面分子標(biāo)志GPIIb和GPA mRNA 的表達(dá),其機(jī)制與c-fos的表達(dá)相關(guān)。4、rhIL-13對(duì)Dami細(xì)胞的增殖無顯著性影響。
【學(xué)位單位】：江西醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R392.1
【部分圖文】：

ne 1 2 3 4圖 4. RNA 瓊脂糖電泳圖。 rhIL-13 作用 Dami 細(xì)胞 30min，、rhIL-13 組、血清組、混合組（rhIL-13+血清）細(xì)胞，用 S

. Lane: 1 2 3 圖 9. Lane: 1 2 3圖 8. rhIL-13 上調(diào) Dami 細(xì)胞 GPIIb mRNA 表達(dá)。Lane 1：對(duì)照組rhIL-13 組(100ug/L,Dami 細(xì)胞傳 5 代)；Lane 3：marker。Fig8. rhIL-13 up-regulates expression of GPIIb mRNA in Dam
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本文編號(hào)：2863014