目的:長期低劑量亞砷酸鈉誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,從而建立抗砷細(xì)胞模型,篩選人類抗砷相關(guān)基因。 方法:常規(guī)條件下分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,檢測部分生物學(xué)特性;實(shí)驗(yàn)組用1μmol/L的亞砷酸鈉誘導(dǎo)〉14周,對照組不加砷劑平行培養(yǎng);48小時(shí)急性砷毒性試驗(yàn)檢測細(xì)胞生存率;免疫熒光染色及熒光激活細(xì)胞分選術(shù)鑒定誘導(dǎo)前后細(xì)胞表面分子;流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期及凋亡檢測;實(shí)時(shí)定量PCR檢測不同誘導(dǎo)時(shí)間金屬硫蛋白MT1E、多藥耐藥蛋白基因MRP1、人類抗砷相關(guān)基因HARRG的表達(dá)豐度;軟瓊脂試驗(yàn)檢測細(xì)胞是否發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化;實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞獲得抗砷性之后,抽提并純化實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞總RNA,分別與Affymetrix UC133 plus 2.0 cDNA表達(dá)譜芯片雜交,生物信息學(xué)分析差異表達(dá)基因并初步進(jìn)行功能分類。 結(jié)果:低劑量亞砷酸鈉急性刺激能夠促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖,長期誘導(dǎo)則表現(xiàn)為抑制細(xì)胞生長;1μmol/L的亞砷酸鈉誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞10周后細(xì)胞初步表現(xiàn)出了抗砷性,14周后抗性較明顯。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞砷誘導(dǎo)后表型無明顯變化,而細(xì)胞周期的變化較大,急性刺激期G2/M期和S期細(xì)胞增加,G0/G1期細(xì)胞減少,適應(yīng)后細(xì)胞周期恢復(fù)至誘導(dǎo)前水平;長期1μmol/L亞砷酸鈉誘導(dǎo)不引起人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞發(fā)生凋亡,超過5μmol/L急性刺激則能夠誘導(dǎo)其凋亡;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞砷誘導(dǎo)一定時(shí)期內(nèi)MT1E、MRP1、HARRG表達(dá)增高,并呈動態(tài)變化趨勢;長期砷誘導(dǎo)后人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在雙層軟瓊脂上不能克隆化生長,沒有發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。細(xì)胞獲得抗砷性后與Affymetrix UC133 plus 2.0基因表達(dá)譜芯片雜交,篩選出差異表達(dá)基因1876條,其中上調(diào)表達(dá)基因1120條,下調(diào)表達(dá)基因756條。 結(jié)論:長期低劑量砷誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠使其產(chǎn)生抗砷性,篩選出差異表達(dá)基因1876條。
【學(xué)位單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R329
【部分圖文】：

d ：CD29 e ：CD90 f：CD166圖 1-2 FACS 檢測人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表型（M1 象限為熒光檢測陰性區(qū)域，M2 象限為熒光檢測陽性區(qū)域；人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 CD29、CD90、CD166 表達(dá)陽性；CD34、CD45 表達(dá)陰性）2.4 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞周期檢測結(jié)果培養(yǎng)的第 2 代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞周期 82％以上在 G0/G1期，處于 S 期的細(xì)胞比例不到 10％，8％左右的細(xì)胞處于 G2/M 期；隨著傳代次數(shù)的增多，G0/G1期細(xì)胞比例下降，S 期細(xì)胞比例增加，G2/M 期細(xì)胞比例變化不大，如圖 1-3 和表 1-3 所示（不同代次用 passage 表示，簡寫為 p）。

d ：CD29 e ：CD90 f：CD166圖 1-2 FACS 檢測人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表型（M1 象限為熒光檢測陰性區(qū)域，M2 象限為熒光檢測陽性區(qū)域；人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 CD29、CD90、CD166 表達(dá)陽性；CD34、CD45 表達(dá)陰性）2.4 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞周期檢測結(jié)果培養(yǎng)的第 2 代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞周期 82％以上在 G0/G1期，處于 S 期的細(xì)胞比例不到 10％，8％左右的細(xì)胞處于 G2/M 期；隨著傳代次數(shù)的增多，G0/G1期細(xì)胞比例下降，S 期細(xì)胞比例增加，G2/M 期細(xì)胞比例變化不大，如圖 1-3 和表 1-3 所示（不同代次用 passage 表示，簡寫為 p）。

無非特異擴(kuò)增；標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均在 0.95 左右，PCR 的效率>90%，符合 Real-time PCR 相對定量標(biāo)準(zhǔn)。oct-4 在第 3、7、12、18 代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)隨著自然培養(yǎng)過程中有輕度下降的趨勢（表 1-4 和圖 1-11）第 7、12、18 代與第3 代分別經(jīng)配對 t 檢驗(yàn)，P 值分別為 0.65、0.27、0.41，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明普通條件下體外培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能夠保持間充質(zhì)干細(xì)胞的特性，沒有在自然培養(yǎng)的過程中發(fā)生分化。p3 p7 p12 p181 2 3 4圖 1-4 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞總 RNA 電泳圖（泳道 1、2、3、4 分別為第 3、7、12、18 代人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞總 RNA，28s、18s 及 5s 顯示清晰，表明總 RNA無降解）
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 王一;ABCG2與抗砷性產(chǎn)生關(guān)系的研究[D];石河子大學(xué);2009年

本文編號：2861377