發(fā)布時間：2020-10-28 17:49

　　 目的：構(gòu)建HIV-1SF2株env基因C1區(qū)與C3區(qū)嵌合片段的克隆并在大腸桿中表達，以便對其表達蛋白的結(jié)構(gòu)和功能進行進一步研究。 方法：用DNAstar軟件輔助設(shè)計引物，以含有HIV-1SF2株前病毒基因組的9B_1R_6質(zhì)粒為模板，PCR法分別擴增出env基因C1和C3段；兩個片段經(jīng)Kpn Ⅰ酶切、T_4連接酶連接和擴增后，再將經(jīng)EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切的嵌合片段插入表達載pGEX-4T-2中，使插入片段位于谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶(GST)讀碼框架下游的多克隆酶切位點(MCS)，構(gòu)建重組表達質(zhì)粒pGEX-4T-2/C1C3；重組質(zhì)粒經(jīng)酶切、測序鑒定后，以TSS法轉(zhuǎn)入大腸桿菌DH_(5α)，IPTG誘導(dǎo)表達融合蛋白，最后經(jīng)SDS-PAG電泳分析表達蛋白圖譜。 結(jié)果：經(jīng)酶切和測序分析，插入片段讀碼框架正確，無堿基錯配，表明成功構(gòu)建pGEX-4T-2/C1C3克�。恢亟M克隆在大腸桿菌DH_(5α)中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，高效地表達出相對分子質(zhì)量(M_r)為43×10~3的融合蛋白。 結(jié)論：重組質(zhì)粒pGEX-4T-2/C1C3的構(gòu)建和表達成功，為進一步研究該表達蛋白的活性和HIV疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
附錄
參考文獻
致謝
綜述
綜述參考文獻

【參考文獻】

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1 毛春生,金寧一,佟明華,郭志儒,殷震;人Ⅰ型免疫缺陷病毒gag-env嵌合基因在重組痘苗中的表達[J];生物工程進展;2000年04期

2 劉巍峰,高東,王祖農(nóng),滕智平,岑山,曾毅;人免疫缺陷病毒1(HIV-1)膜蛋白基因片段在酵母中的克隆表達[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1999年01期

本文編號：2860406