目的 采用一種試驗方法，經(jīng)PCR結(jié)合酶切同時利用內(nèi)參照一次區(qū)分四種皰疹病毒感染。 方法 利用DNAstar軟件包分別從HCMV，HSV-1，HSV-2和EBV的DNA聚合酶高保守基因區(qū)中設(shè)計一對共享序列引物，根據(jù)四種基因產(chǎn)物序列選擇Sma I和BamH I作為限制性內(nèi)切酶，對PCR產(chǎn)物進行酶切，同時在相同條件下，利用β_2-MG作為內(nèi)參照，進行反應(yīng)體系的內(nèi)部質(zhì)控，從而驗證擴增是否成功。做到在一個方法中，經(jīng)一次PCR擴增并結(jié)合酶切即可區(qū)分四種病毒的感染。結(jié)果與細胞培養(yǎng)比較從而對該試驗方法作出評估。 結(jié)果 β_2-MG及共享序列引物均出現(xiàn)擴增條帶為陽性，陽性者經(jīng)Southern雜交證實特異性，再結(jié)合限制性酶切，電泳后四種病毒擴增的產(chǎn)物分別是HCMV 594bp，HSV-1與HSV-2均為522bp，EBV 528bp.HSV-1被SmaI酶切形成478和44 bp兩個片段，但沒有BamH I酶切位點；HSV-2被BamH I酶切后形成224和298bp兩個片段，沒有SmaI酶切位點；EBV各有一個SmaI和BamH酶切位點，分別切成101與427，246和282bp四個片段；HCMV沒有兩種酶切位點。用此方法檢測臨床標本與細胞培養(yǎng)比較后，得出3項重要的綜合評估指標，及診斷敏感性、診斷特異性和診斷指數(shù)分別為100％，92.3％和192.3％，均在理想范圍內(nèi)。 結(jié)論 方法驗證和評估指標證實了該法的可行性，PCR結(jié)合酶切利用內(nèi)參照可作為一種簡易，快速，敏感和特異的對四種皰疹病毒科病毒基因鑒別診斷方法，從而為臨床提供診斷參考。此法的建立對早期發(fā)現(xiàn)孕婦活動性HSV-1或HCMV感染并及時予以特異治療，防止和減少先天性畸形以及優(yōu)生優(yōu)育實驗室監(jiān)測工作有重要意義。
【學位單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：R346
【文章目錄】：
1 前言
2 材料和方法
    2.1 材料和儀器設(shè)備
    2.2 實驗方法
    2.3 方法驗證與實驗質(zhì)量評估
3 結(jié)果
2-MG擴增產(chǎn)物結(jié)果'>    3.1 β₂-MG擴增產(chǎn)物結(jié)果
    3.2 PCR結(jié)合限制性內(nèi)切酶圖譜分析結(jié)果
    3.3 臨床標本檢驗結(jié)果
    3.4 方法驗證結(jié)果
    3.5 方法評估結(jié)果
4 討論
5 小結(jié)
參考文獻
致謝
文獻綜述

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 鄭志明,MarieL.Landry,熊菊貞;Ⅰ型和Ⅱ型單純皰疹病毒的某些生物學特征和用內(nèi)切酶分型的研究[J];病毒學報;1986年01期

本文編號：2860351