本文關(guān)鍵詞：CD36在高脂誘導(dǎo)的小鼠脂肪組織代謝性炎癥中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：肥胖、血脂異常、脂肪肝等代謝性疾病已經(jīng)成為嚴(yán)重影響人類健康的常見病及多發(fā)病,但其發(fā)病機制尚不完全清楚。目前認(rèn)為由營養(yǎng)物和代謝產(chǎn)物所觸發(fā)的低豐度的代謝性炎癥反應(yīng)是代謝性疾病發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)。脂肪酸轉(zhuǎn)運酶/CD36 (fatty acid translocase/CD36, FAT/CD36)屬于B類清道夫受體家族,不僅可以介導(dǎo)長鏈脂肪酸的跨膜轉(zhuǎn)運,還可識別眾多致炎性的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物,與代謝性炎癥的發(fā)生密切相關(guān)。本課題選用C57BL/6J小鼠、野生型(widetype,WT)/CD36基因敲除(CD36 knockout, CD36KO)小鼠及3T3-L1脂肪細胞,研究高脂飲食對脂肪組織CD36的表達和炎癥反應(yīng)的影響,并進一步探討CD36在脂肪組織代謝性炎癥中的作用。方法：將8周齡雄性C57BL/6J小鼠分別隨機分為普通飲食組(normal chew diet, NCD)和高脂飲食組(high fat diet, HFD),喂養(yǎng)14周后,酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測定小鼠血清游離脂肪酸(free fatty acid, FFA)含量；應(yīng)用熒光實時定量(Real-Time PCR, RT-PCR)和western blot檢測脂肪組織中CD36及炎癥因子白細胞介素1(Interleukin-1, IL-1β)、白細胞介素6(Interleukin-6, IL-6)、腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)趨化因子單核細胞趨化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein-1, MCP-1),巨噬細胞炎性蛋白-1(Macrophage inflammatory protein-1, MIP-1) mRNA和蛋白表達；免疫組織化學(xué)染色檢測脂肪組織CD36、巨噬細胞表面標(biāo)記物F4/80蛋白表達；進一步,選用8周齡雄性WT和CD36KO小鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)14周,用上述方法檢測WT和CD36KO小鼠的脂肪組織炎癥反應(yīng)。3T3-L1小鼠成纖維細胞,經(jīng)誘導(dǎo)分化為脂肪細胞后分為：對照組(Control, CTL)、不同濃度棕櫚酸處理組(Palmitic acid,PA)處理時間為24小時。采用油紅O染色觀察3T3-L1成纖維細胞脂滴形成情況；RT-PCR和Western Blotting檢測3T3-L1脂肪細胞CD36、炎癥因子(IL-1β,IL-6,TNF-α)、趨化因子(MCP-1,MIP-1)、C-Jun氨基末端激酶(Jun N-terminal kinase, JNK)、磷酸化C-Jun氨基末端激酶(PhosphorylationJun N-terminal kinase, P-JNK)蛋白表達,雙熒光素酶報告基因檢測脂肪細胞NFκB活性；提取脂筏并用western blot檢測小窩蛋白1(caveolin-1)、CD36含量；免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, CO-IP)檢測脂肪細胞CD36/TLR4共聚體的形成。結(jié)果：與普通飲食組相比,高脂飲食能使C57BL/6J小鼠血清FFA明顯增加,使脂肪組織內(nèi)CD36 mRNA約升高了3.23±0.64倍(P0.05),CD36蛋白表達約升高了0.49±0.10倍(P0.05)；炎癥因子IL-1、TNF-α、IL-6 mRNA分別約升高了0.78±0.46倍、1.69±0.65倍、0.94±0.52倍(P0.05)；趨化因子MCP-1和MIP-1 mRNA分別約升高0.89±0.20倍、1.94±0.38倍(P0.05)；相應(yīng)炎癥因子TNF-α、 IL-1、IL-6,趨化因子MCP-1、MIP-1的蛋白表達也呈明顯升高趨勢(P0.05),同時巨噬細胞浸潤顯著增加。與高脂飲食喂養(yǎng)的WT小鼠相比,CD36KO小鼠的脂肪組織炎癥因子IL-1、TNF-α、IL-6的mRNA含量分別為WT小鼠的0.56±0.12、0.35±0.097、0.27±0.051(P0.05)；趨化因子MCP-1和MIP-1的mRNA表達為WT小鼠的0.59±0.15和0.43±0.12(P0.05)；同時CD36KO小鼠脂肪組織炎癥／趨化因子INF-α、IL-1、IL-6、MCP-1、MIP-1的蛋白表達也明顯降低(P0.05),巨噬細胞浸潤顯著減少。進一步在體外細胞實驗中,RT-PCR及Western Blotting檢測發(fā)現(xiàn)棕櫚酸能使脂肪細胞CD36、炎癥因子(IL-1β、IL-6、 TNF-α)、趨化因子(MCP-1、MIP-1)基因蛋白表達量升高(P0.05)。提取3T3-L1脂肪細胞脂筏發(fā)現(xiàn),PA處理組的定位脂筏部分CD36蛋白占總表達量的比例增加(P0.05)。免疫共沉淀發(fā)現(xiàn)PA能使CD36/TLR4共聚體形成增加(P0.05)。同時Western Blotting檢測表明PA處理條件下PJNK/JNK水平增加(P0.05)。雙熒光素酶報告基因檢測發(fā)現(xiàn),與對照組相比PA能使脂肪細胞NFκB活性增強(P0.05)。結(jié)論：高脂或棕櫚酸能顯著上調(diào)脂肪組織及脂肪細胞CD36的表達,促使CD36/TLR4共聚體的形成,進而激活JNK/NFκB炎癥信號通路,參與了代謝性炎癥的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：脂肪酸轉(zhuǎn)運酶(FAT/CD36) 脂肪組織 CD36/TLR4共聚體 代謝性炎癥
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R363
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-13
• 前言13-15
• 第一部分 高脂促進C57BL/6J小鼠脂肪組織CD36表達及炎癥反應(yīng)15-33
• 1 材料和方法15-26
• 2 結(jié)果26-30
• 3 討論30-33
• 第二部分 CD36基因敲除可以減輕高脂誘導(dǎo)的小鼠脂肪組織炎癥的發(fā)生33-39
• 1 材料和方法33-34
• 2 結(jié)果34-37
• 3 討論37-39
• 第三部分 棕櫚酸促進3T3-L1脂肪細胞CD36/TLR4共聚體形成、介導(dǎo)代謝性炎癥的產(chǎn)生39-55
• 1 材料和方法39-47
• 2 結(jié)果47-52
• 3 討論52-55
• 全文總結(jié)55-56
• 參考文獻56-60
• 文獻綜述60-70
• 參考文獻65-70
• 致謝70-71
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文71
• 攻讀碩士學(xué)位期間參加的學(xué)術(shù)會議71

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本文編號：286018