肝臟是人類(lèi)最重要的能量代謝、生物合成和物質(zhì)轉(zhuǎn)化器官。嚴(yán)重肝臟疾病往往需要原位肝移植(OLT)才能夠獲得根治性的治療,但由于供肝數(shù)量有限、手術(shù)復(fù)雜且費(fèi)用高昂等原因原位肝移植手術(shù)難以廣泛開(kāi)展。肝細(xì)胞移植具有以下優(yōu)點(diǎn):①一個(gè)供體可給予多個(gè)受體提供細(xì)胞;②移植技術(shù)簡(jiǎn)單;③供肝細(xì)胞免疫原性低且可凍存;④可重復(fù)移植,如移植失敗,對(duì)受體的影響也十分微小。但肝細(xì)胞移植也面臨人類(lèi)肝細(xì)胞來(lái)源有限,而異種移植(Xenotransplantation)免疫排斥反應(yīng)劇烈等制約因素。肝干細(xì)胞具有多向分化能力,可分化為肝細(xì)胞與肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞,肝干細(xì)胞研究的深入開(kāi)展為肝細(xì)胞來(lái)源開(kāi)辟了新途徑。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)具有多向分化能力,被稱(chēng)作肝外源性肝干細(xì)胞。MSC在肝內(nèi)可演變?yōu)槁褕A細(xì)胞、肝細(xì)胞及膽管細(xì)胞。MSC的這些特性使利用患者自身MSC進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化,然后自體細(xì)胞移植成為可能。從而可以同時(shí)解決移植細(xì)胞來(lái)源匱乏和移植后免疫排斥這兩個(gè)肝細(xì)胞移植面臨的主要問(wèn)題。 目的:1.分離人胚胎MSC并體外培養(yǎng),摸索人胚胎MSC的分離、培養(yǎng)方法。2.構(gòu)建肝損傷合并自身肝細(xì)胞再生抑制動(dòng)物模型。3.將人胚胎MSC移植入自身肝細(xì)胞再生抑制的肝損傷大鼠脾臟內(nèi),觀察其在大鼠體內(nèi)的分化演變,為肝細(xì)胞移植治療肝衰竭奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 材料和方法:1.用密度梯度離心法分離流產(chǎn)胎兒的MSC,用MEM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)后檢測(cè)人胚胎MSC含量和活性。2.用AAF灌喂大鼠后行肝部分切除,分時(shí)段檢測(cè)肝功。3.將人胚胎MSC移植到肝損傷合并自身肝細(xì)胞再生抑制大鼠脾臟,術(shù)后分時(shí)段取脾臟、肝臟免疫組化染色了解人ALB、CK 8、CK 18、CK19的表達(dá)情況,糖原染色了解細(xì)胞內(nèi)糖原含量。 結(jié)果:1. 分離獲得的人胚胎MSC含量為85%～93%。體外培養(yǎng)7天后人胚胎MSC含量大于93%,細(xì)胞活性在95%以上。2.AAF灌喂后肝損傷大鼠的肝再生抑制明顯,肝功能恢復(fù)緩慢。3.人胚胎MSC移植后10天大鼠脾臟的人CK8、CK18、CK19免疫組化染色即可見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞,移植后2周大鼠脾臟組織內(nèi)人ALB免疫組化染色可見(jiàn) 國(guó)家自然科學(xué)基金資助(30070347,30100080)。 WP=8 陽(yáng)性細(xì)胞,以后至12周均有陽(yáng)性顯示。未進(jìn)行MSC移植的對(duì)照組未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。人胚胎MSC移植后大鼠肝臟免疫組化染色結(jié)果和脾臟相似,染色陽(yáng)性細(xì)胞主要位于移植后大鼠肝臟的匯管區(qū),這也說(shuō)明其來(lái)源是由脾臟經(jīng)門(mén)靜脈進(jìn)入肝臟。對(duì)照組肝臟未見(jiàn)陽(yáng)性細(xì)胞。人胚胎MSC移植后2周大鼠脾臟糖原染色可見(jiàn)陽(yáng)性,至第12周仍可以檢測(cè)到陽(yáng)性細(xì)胞,顯示分化后細(xì)胞具有一定的糖原合成能力。 結(jié)論: 1.用密度梯度離心法分離后MEM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)的人胚胎MSC純度高,生物活性好。 2.AAF灌喂后肝部分切除大鼠肝細(xì)胞再生抑制明顯,是較好的肝損傷合并自身肝細(xì)胞再生抑制動(dòng)物模型。 3.人胚胎MSC能夠在自身肝細(xì)胞再生抑制的肝損傷大鼠脾臟內(nèi)分化為肝細(xì)胞。人胚胎MSC移植后有部分遷移至肝臟,并分化為肝細(xì)胞。
【學(xué)位單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類(lèi)】：R329.2
【部分圖文】：

(二)試劑配制0.2% AAF 的配制：將 200mgAAF 粉劑溶于 100m℃冰箱保存。(三)主要儀器設(shè)備常用手術(shù)器械及大鼠灌喂針 BCD-199 型冰箱 EQU/04-EVC 型超凈臺(tái) 7020 型自動(dòng)生化分析儀 三、肝細(xì)胞再生抑制的誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組大鼠按 10mg/kg.d 的灌喂劑量灌喂 0.2%的 情況，正常喂食。對(duì)照組大鼠正常飼喂。四、大鼠部分肝切除手術(shù)實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組大鼠均行肝左側(cè)葉（約占大鼠全肝禁食，術(shù)前 2 小時(shí)禁水。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 江海洪;王宇明;劉國(guó)棟;陳耀凱;李俊剛;趙文利;;小鼠胚胎干細(xì)胞分化為肝前體細(xì)胞及其脾內(nèi)移植的實(shí)驗(yàn)研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年06期

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本文編號(hào)：2857515