目的：設計含非甲基化胞嘧啶和鳥嘌呤的寡聚脫氧核糖核苷酸(CpG-ODN)，以期用足月新生兒臍血篩選出具有較強免疫增強作用的CpG-ODN；比較CpG-ODN對新生兒(早產(chǎn)兒和足月兒)臍血和成人外周血單個核細胞(PBMC)的增殖效應；觀察CpG-ODN對孕鼠及其新生鼠、免疫抑制鼠和老年鼠體液免疫功能的影響。 方法：按不同設計原則設計5種CpG-ODN，用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色(MTT)法從中篩選出具有較強免疫增強作用的CpG-ODN；用MTT法觀察CpG-ODN對新生兒(早產(chǎn)兒和足月兒)臍血和成人外周血單個核細胞增殖的差異性。用公認對正常小鼠有明顯免疫增強作用的CpG1826(5’-TCCATCTCACGTTCCTGACGTT-3’)免疫孕鼠(20μg/只)、免疫抑制鼠(20μg/只)和老年鼠(20μg/只或30μg/只)，用ELISA法檢測孕鼠及其新生鼠、免疫抑制鼠和老年鼠的血清IgG抗體，并取小鼠脾臟進行病理切片并HE染色，在鏡下觀察脾臟的細胞結構變化。 結果：篩選出1條具有較強免疫增強作用的CpG-ODN(5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3)。該條CpG-ODN對成人PBMC增殖效應最明顯，其次是足月兒，但對早產(chǎn)兒的增殖效應不明顯；CpG1826可以提高正常成年、免疫抑制鼠和老年鼠血清IgG抗體水平，對孕鼠及其子鼠血清IgG水平無明顯影響；20μg/只的CpG1826劑量沒有導致胎兒宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)等并發(fā)癥。 結論：①MTT法是一種篩選具有免疫增殖效應CpG-ODN的理想實驗方法；②新生兒臍血可作為篩選CpG-ODN免疫增殖效應的實驗材料；③CpG-ODN(5’-GGTGCATCGATGCAGGGGGG-3’)具有明顯的免疫增強作用，早產(chǎn)兒、足月兒臍血和成人外周血單個核細胞對該CpG-ODN反應具有差異性；④以20μg/只的CpG1826劑量免疫孕鼠，孕鼠及其新生鼠沒有出現(xiàn)免疫增強作用，也未導致IUGR等不良反應；⑤CpG1826對正常成年鼠、免疫抑制鼠和老年鼠均有較強的免疫增強作用，提示CpG-ODN是一種新型的免疫佐劑，有較大的開發(fā)價值及廣泛的臨床應用前景。
【學位單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2003
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

2.8，J、時，3.16，J、時，4.2.對CpG一OON降解的監(jiān)側(與足月果，提示我們選擇24小時為CpCpG一ODN的MTT培養(yǎng)時間。CpG一ooN:分別將本研究設計的理鹽水)與9例足月兒的臍血共4、圖4中表明:非硫代化CpG3白對照的OD值相比，差異均具白對照的0D值相比，差異亦具有差異亦有顯著意義(P<0.05);05)。
【參考文獻】

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1 許洪林,王四清,王世峰,郭斐,陸柔劍,阮力;利用小鼠模型評價含有5'-GTCGTT-3'特征序列的人CpG寡脫氧核苷酸的免疫刺激活性[J];病毒學報;2001年01期

2 王四清,田淑芳,許洪林,郭斐,王文,陳紅,王秀平,王世峰,阮力;CpG對乙型肝炎基因重組(CHO細胞)疫苗免疫效果的影響[J];病毒學報;2002年02期

3 陳吉泉,沈策,顏澤敏,修清玉;CpG脫氧寡核苷酸對抗原致敏性小鼠氣道反應的影響[J];第二軍醫(yī)大學學報;2001年12期

4 張怡娟,郭衛(wèi)芳,于方,李旭芳;早產(chǎn)兒免疫相關因素的分析[J];河南診斷與治療雜志;2002年04期

5 王越,屈野,陳莉,潘菊芬;早孕婦女外周血Th1/Th2細胞亞群的測定[J];免疫學雜志;2001年02期

6 金美玲,蔡映云,袁正宏,鄭玲潔,張偉;CpGDNA預防小鼠哮喘模型的形成[J];復旦學報(醫(yī)學版);2002年05期

7 郭勇,曹星梅,劉捷,田瑋,張王剛,姚煜;CpG寡核苷酸對人外周血單個核細胞的免疫刺激作用[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2002年05期

8 丁紅香,錢燕,樓文文;早產(chǎn)兒TNFα、GM-CSF和sIL-2R檢測及臨床意義[J];新生兒科雜志;2000年05期

9 張祖貽,楊遠,張見平;CpG-ODN對哮喘小鼠Th1/Th2相關細胞因子表達的影響[J];江蘇醫(yī)藥;2002年03期

10 李文波,姚志強,周永興,馮志華;應用含CpG基序的寡核苷酸增強乙型肝炎病毒基因疫苗誘導的細胞免疫應答[J];中華傳染病雜志;2000年02期

本文編號：2856195