造血干細(xì)胞(hematopoietic stem cells,HSC)是具有高度自我更新、增殖和分化能力的一類細(xì)胞，移植到體內(nèi)后可以重建各系造血。目前，HSC的主要來(lái)源有骨髓、臍帶血及動(dòng)員后外周血。但無(wú)論哪一種來(lái)源都存在著一定的缺陷，如數(shù)量不足或者移植后的植入晚等。胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ES細(xì)胞)具有無(wú)限增殖潛能，在體外可以向造血細(xì)胞分化，為HSC移植開(kāi)辟了新的來(lái)源。然而，由于ES源造血細(xì)胞的骨髓植入性和正常造血細(xì)胞明顯不同，尚未發(fā)現(xiàn)具備完整基因組的ES源造血細(xì)胞移植后使受體造血重建的報(bào)道。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSC)體外具有造血支持作用，與CD34~+細(xì)胞共輸入受者體內(nèi)可以促進(jìn)HSC向骨髓、脾等造血部位的植入。因此，研究MSC對(duì)ES向造血細(xì)胞分化過(guò)程中的影響，將可能為ES向造血細(xì)胞的治療性分化提供有益的信息。 本研究中，我們分離培養(yǎng)了小鼠骨髓MSC，并初步探討了其對(duì)ES細(xì)胞造血分化的調(diào)控作用。首先，我們采用不同于人MSC的培養(yǎng)方法，利用骨髓細(xì)胞與股骨共培養(yǎng)，模擬體內(nèi)骨髓MSC生長(zhǎng)的微環(huán)境，加速小鼠MSC的純化培養(yǎng)。然后，對(duì)擴(kuò)增培養(yǎng)的各代細(xì)胞進(jìn)行了表型及分化功能的鑒定。從第四代開(kāi)始，以后各代細(xì)胞CD34、CD45造血細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞的表面標(biāo)志基本呈陰性，CD29、CD44、CD105及Sca-1等MSC相對(duì)特異性的表面標(biāo)志均有較高的表達(dá)；另外，在特定誘導(dǎo)體系內(nèi)擴(kuò)增培養(yǎng)的各代細(xì)胞可以向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞分化。從而說(shuō)明我們分離培養(yǎng)的細(xì)胞為MSC。 在成功分離培養(yǎng)并擴(kuò)增了小鼠MSC之后，利用ES細(xì)胞與其共培養(yǎng)以考察其對(duì)ES細(xì)胞造血分化的調(diào)控作用。與MSC共培養(yǎng)之后的ES細(xì)胞含有顯著增加的擬胚體形成細(xì)胞(p＜0.05)，在集落形成細(xì)胞(colony-forming cells,CFC)檢測(cè)體系內(nèi)未見(jiàn)造血集落生成。RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)上述細(xì)胞表達(dá)ES細(xì) 摘要 胞特有的轉(zhuǎn)錄因子O。t－4，不表達(dá)造血分化相關(guān)基因Flki、GAh－l、幾HI 而懸浮培養(yǎng)組及與NIH／3T3共培養(yǎng)組細(xì)胞發(fā)生分化，產(chǎn)生造血集落，表達(dá)造 血特異性基因。這些結(jié)果表明：骨髓MSC能夠抑制ES細(xì)胞的初始分化。 有趣的是，通過(guò)CFC檢測(cè)發(fā)現(xiàn)：與其它兩組比較，MSC共培養(yǎng)組來(lái)源 的擬胚體中含有顯著增加的CFC數(shù)目Om．05卜與MSC共培養(yǎng)16天的細(xì) 胞所形成的擬胚體中含有 CFC最多，其數(shù)目可達(dá) 668土58．59465個(gè)／IX 10屯B 細(xì)胞，而懸浮培養(yǎng)組及與NIW3T3共培養(yǎng)組中擬胚體的CFC產(chǎn)率最高為 213．3士35．5個(gè)與278．7士35．3個(gè)。此夕，與MSC共培養(yǎng)之后，ES細(xì)胞的 巨核細(xì)胞分化比例有顯著提高h(yuǎn)狽．05肝因此，MSC與ES細(xì)胞共培養(yǎng)可以 高效誘導(dǎo)ES細(xì)胞向造血細(xì)胞分化，這可能與MSC分泌SCF，IL＊，TPO 及SDFq等造血細(xì)胞因子有一定關(guān)系。但其具體機(jī)制仍有待于更深入的研究。 鑒于小鼠骨髓來(lái)源的MSC對(duì)ES細(xì)胞體外培養(yǎng)的全能性（Totipotency）維持 及造血活性誘導(dǎo)作用的多樣性。因此，洞悉此調(diào)控作用的分子機(jī)制，及其在 未來(lái)的ES細(xì)胞／造血組織工程中的策略性應(yīng)用，必將推動(dòng)相關(guān)領(lǐng)域的工作進(jìn) 展。
【學(xué)位單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R329
【文章目錄】：
前言
第一部分 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定
    材料和方法
    結(jié)果
    小結(jié)
第二部分 MSC對(duì)ES細(xì)胞造血分化的調(diào)控作用
    材料和方法
    結(jié)果
    小結(jié)
討論
總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
文獻(xiàn)綜述
附將發(fā)表文章: 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)胚胎干細(xì)胞造血分化的影響中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志2003，11（3）

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2853358