前言 杜氏／貝克型肌營養(yǎng)不良癥(Duchenne/Becker Muscular Dystrophy)是一種人類常見的致死性神經(jīng)一肌肉系統(tǒng)的X連鎖隱性遺傳病，二者是dystrophin基因等位基因異質(zhì)性疾病，發(fā)病率分別為活產(chǎn)男嬰的1／3500和1／30000。其中DMD是肌營養(yǎng)不良癥中最嚴重和最常見的類型，發(fā)病早(約3歲左右)，進展快；Gowers征陽性，下肢病變早于上肢，對稱性發(fā)展；腓腸肌、股四頭肌、三角肌呈假性肥大，伴有關(guān)節(jié)攣縮、脊柱畸形；血清肌酸磷酸激酶(CPK)明顯升高；肌活檢顯示營養(yǎng)不良性肌病型，預(yù)后極差，患者多于20歲左右因呼吸衰竭、心力衰竭或呼吸道感染而死亡。BMD為DMD的等位良性型，發(fā)病較晚(5～20歲)，病情相對較輕，進展緩慢，預(yù)后也較差，患者多于40歲左右死于呼吸衰竭或呼吸道感染。 Dystrophin基因定位于Xp21.1～21.3，全長約為2400kb，是目前已知的人類最大的基因，占整個X染色體長度的1％及整個基因組長度的0.1％，其中78個內(nèi)含子為該基因的大部分序列，其79個外顯子編碼序列總長度僅為14kb。Dystrophin基因突變以缺失最為常見，約占55～65％，重復(fù)約占5～10％，1／3左右為新生突變。據(jù)文獻報道98％的缺失斷裂點發(fā)生在內(nèi)含子區(qū)域，缺失斷裂點的分布是非隨機的，內(nèi)含子序列在不同地域及民族中存在顯著性差異。近年來，Chambedain等及Beggs等在兩個缺失熱點區(qū)共設(shè)計了18對引物，建立了檢測本病基因缺失的多重PCR體系，使DMD／BMD的基因診斷方法更簡便準(zhǔn)確，其優(yōu)越性已大大超過Southern印跡分析。Dystrophin基因缺失的分布特點隨地域及民族的差異而有不同特點。我們應(yīng)用12對外引物的多重PCR法對我國東北地區(qū)120例DMD／BMD患者進行缺失篩查，了解缺失型 患者dystrophin基因缺失的斷裂點分布，同時排除內(nèi)含子長度的 影響因素后分析中央缺失熱區(qū)各內(nèi)含子的不穩(wěn)定性及對各引物進 行優(yōu)化組合，并且為29例DMD／BMD高危孕婦開展了遺傳咨詢和 產(chǎn)前基因診斷工作。 實驗材料與方法 臨床診斷為DMD／BMD的來自東北地區(qū)共120例男性患者， 其中BMD 18例均為散發(fā)，在102例DMD患者中22例有家族史。 30例對照者均為正常人。每名受檢者采外周靜脈血 1－SInl；29 名DMD／BMD先證者的母親（其中5名有家族史）再次妊娠時要 求作產(chǎn)前基因診斷，于孕早期k5－60天）抽取胎兒絨毛或孕中期 門一20周）抽取革水。 提取外周靜脈血DNA，用多重PCR法檢測患者缺失分布；對 查出缺失的患者用PCR檢測斷裂點分布。從胎兒絨毛或羊水中 提取胎兒DNA后，先用PCR擴增判斷胎兒性別，再行多重PCR擴 增檢測男性胎兒是否缺失。若胎兒為女性或男性胎兒未查出有外 顯子缺失，則行STR單體型連鎖分析（詳見另文人 實驗結(jié)果 120例患者中檢出至少有二個外顯子缺失者為59例門例有 家族史人檢出率為49．2％，其中40例K7．8％）分布于外顯子 45－53，13例（22％）分布于外顯子8－19，5例（8．5％）在這兩個 熱區(qū)內(nèi)均有外顯子缺失，僅有 1例一．7％）檢出外顯子 34和 43缺 失。59例缺失型患者中，斷裂點位于內(nèi)含子44－52內(nèi)占66．4％ ，以內(nèi)含子 50為最多（占 14．8％），內(nèi)含子 44j 次之（分別為 11．7％在．6％人大多數(shù)K4．7％）的斷裂點位于內(nèi)含子 o－52 內(nèi)。兩對外顯子引物的優(yōu)化組合為48和8，總檢出率為30．8％， 占12對引物檢出率的62．6％。29例高危胎兒中男性16例K例 ·2· 有家族史人其中9例被檢出為缺失型O例有家族史廠缺失位點 與先證者相同。 結(jié) 論 首次對東北地區(qū)120例DMD瓜MD患者用12對引物進行多 重PCR方法缺失篩查，缺失檢出率為49．2％，缺失主要分布于兩 個熱區(qū)內(nèi)：外顯子8－19p2呢）及外顯子45－53K7．8阮X并且 外顯子8附近區(qū)域可能是東北地區(qū) dystrophin基因缺失斷裂的高 發(fā)區(qū)。 東北地區(qū)人群dystroPhin基因內(nèi)含子44J2高度不穩(wěn)定，其 中內(nèi)含子44的穩(wěn)定性要高于中央缺失熱區(qū)分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性， 內(nèi)含子50的不穩(wěn)定性存在地區(qū)及種族差異。 本研究所統(tǒng)計的外顯子引物優(yōu)化組合為檢測患者或進行產(chǎn)前 基因診斷時提供了捷徑，我們應(yīng)用多重PCR方法對DMD／BMD高 危男性胎兒進行產(chǎn)前基因診斷，尤其是對散發(fā)家系是可行的并且 有其優(yōu)越性。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R394
【部分圖文】：

為第2組外顯子51、12、50、53引物多重PCR電泳條帶
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本文編號：2852683