隨著輔助生育技術(shù)的日趨發(fā)展，使越來越多的不孕癥患者獲得妊娠，但臨床上仍有一類患者，在常規(guī)或體外受精治療周期中卵子成熟和發(fā)育遲緩、有OHSS危險，如多囊卵巢綜合征(PCOS)患者，對其采取常規(guī)的促排卵方案往往不能奏效或風(fēng)險極大。自從1991年韓國的Cha通過人未成熟卵母細胞的體外成熟技術(shù)(IVM)獲得第一個孩子以來，IVM技術(shù)逐漸顯示出其重要的價值，臨床上也得到越來越廣泛的應(yīng)用。這一技術(shù)也為我們在體外研究卵母細胞的發(fā)育和成熟的調(diào)控機理，提供了很好的基礎(chǔ)和條件。近年來，隨著分子生物學(xué)的飛速發(fā)展，眾多研究表明卵子成熟與蛋白質(zhì)合成、磷酸化狀態(tài)的改變密不可分。已證實與卵子發(fā)育和成熟相關(guān)的調(diào)控物質(zhì)包括StAR(steroidogenic acute regulatory protein)、減數(shù)分裂促進因子MPF、成熟刺激因子(MPF)、絲裂原激活蛋白激酶家族(MAPK)、蛋白激酶C(PKC)、cAMP／蛋白激酶A(cAMP／PKA)等等，但仍有許多未知蛋白和已知蛋白參與調(diào)節(jié)的具體過程尚不清楚，需要進一步研究。目前，隨著人類基因組工作計劃的完成，功能基因組的研究已成為全球的熱點，人們期待從蛋白質(zhì)功能水平上直接揭示疾病、發(fā)育的發(fā)生機制。蛋白質(zhì)二維電泳和質(zhì)譜技術(shù)的日趨成熟使這項研究飛速發(fā)展，因為它從能夠從整體水平上揭示可能參與人類疾病發(fā)生、基因調(diào)控、組織發(fā)生和發(fā)育等等蛋白分子調(diào)控機制。本研究采用了蛋白二維電泳和蛋白質(zhì)譜分析技術(shù)在蛋白質(zhì)組水平上直接研究卵子發(fā)育、成熟的機制，全文分 內(nèi)．八廠H人學(xué)燦「學(xué)L淪義 四部分來進行論述。 第一部分 女性生殖方面蛋白質(zhì)組研究技術(shù)平臺的建立 隨著基因組測序工作的完成后，目前人類面臨的艱 巨的任務(wù)就是對每一個基因所編碼蛋白質(zhì)功能和修飾 的研究。因此，越來越多的工作投入到對蛋白質(zhì)紐的研 究上。所謂蛋白質(zhì)組的研究就是對基因組所編碼全部的 蛋白質(zhì)的研究。這種分析包括對一個單一樣品同時進行 系統(tǒng)化的分離、鑒定和定量的研究。自七十年代問世以 來，雙向電泳是應(yīng)用最廣泛、最有效的一種分離來自各 種組織、細胞以及另IJ的生物樣品的分離枝術(shù)。同質(zhì)譜鑒 定蛋白質(zhì)枝術(shù)的合用，他們是目前用于蛋白質(zhì)組的最有 效的枝術(shù)手段。本研究就雙向凝膠電泳和質(zhì)譜枝術(shù)在卵 巢蛋白質(zhì)組研究中的應(yīng)用力。以探討，試圖建立蛋白質(zhì)組 研究枝術(shù)平臺，并將之用于女性生殖領(lǐng)域方面。 本實驗結(jié)果女。下：高重復(fù)性和高分辨率小鼠蛋白圖 譜的獲得。軟件分析顯示，2化。和llcm銀染的蛋白凝 校上的 蛋白盧、分另 有 二000多年100O多點，衛(wèi)Icm考馬斯 亮籃蛋白凝膠有50O多點。膠重復(fù)性好，大部分蛋白點 位于相 對相同的 位置。相對于 11c nl白 月，2 4 c m 6 月 分 辨率更高，點分離清楚；相較于考馬斯亮藍染色，銀染 的靈敏度更高，檢測靈敏度可達到 2 0 O 119水平。結(jié)論： 高分辨牟、重復(fù)性好的雙向電泳4支術(shù)配合快速鑒定蛋白 的質(zhì)譜4支術(shù)在女性生殖領(lǐng)域蛋白質(zhì)組的研究中有著廣 泛的應(yīng)用前景。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R321
【部分圖文】：

養(yǎng)液和TcM199銀染的雙向電泳圖譜。第一向等電聚焦上樣量均為3的1Icm膠條，聚焦時間16000Vh。第二向是濃度12.5%的聚丙烯酸胺兩個11cm膠條同時放于一個23cmx30cm凝膠上。蛋白質(zhì)銀染檢測，并存，通過2一DImagemaster軟件分析。左側(cè)為wM培養(yǎng)液的雙向電泳。水平方向為等電聚焦，垂直方向為按分子量的聚丙烯酞胺凝膠點用。相對確定的位置，兩張膠存在ro個左右的差異蛋白。其中質(zhì)譜鑒定用箭頭所標示，鑒定結(jié)果如表一所示
【引證文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 喻小燕;曹晶;謝錦云;;蛋白質(zhì)組學(xué)在發(fā)育生物學(xué)研究中的應(yīng)用[J];金陵科技學(xué)院學(xué)報;2006年04期

本文編號：2852780