甘露聚糖結(jié)合凝集素(mannan-binding lectin，MBL)是C型凝集素超級家族膠凝素家族中一種重要的天然免疫防御分子，可識別結(jié)合各種病原體表面的糖分子，并通過激活補體凝集素途徑而破壞病原體，或通過與吞噬細胞表面膠凝素受體結(jié)合介導直接調(diào)理作用。然而，MBL功能的發(fā)揮有賴于其一定的血清濃度，MBL缺乏或血清濃度過低是引起調(diào)理吞噬缺損的根本原因，可增加機體對各種病原微生物的易感性而導致機體反復感染，并且與自身免疫性疾病如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupuserythematosus，SLE)、類風濕性關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)的發(fā)生、發(fā)展有關。 現(xiàn)已證實，MBL血清濃度低下主要與其結(jié)構(gòu)基因第一外顯子的B、C和D等位基因變異體(分別編碼54、57和52位氨基酸)有關，而正常的MBL等位基因為A。每一種變異體均由單堿基突變引起，致使MBL分子的膠原樣區(qū)發(fā)生改變，導致突變個體血清MBL水平低下，有可能突變MBL分子的功能也受損。突變等位基因頻率在不同種族人群差異很大，但總體上高的令人驚奇，可達0.29。亞洲人MBL血清濃度低下主要由54位密碼突變引起。 我國是一個多民族人口大國，有必要對各民族人群MBL結(jié)構(gòu)基因的突變情況進行調(diào)查，以便為我國MBL缺損的防治(研究)提供決策依據(jù)。鑒于此，我們對漢族、維吾爾族人群MBL基因第54位點突變的情況進行了研究。 目的： 1．建立敏感性高、特異性強、簡單快捷、適合我國國情(條件較差)的MBL基因點突變和SNP的檢測技術(shù)。 2．利用該技術(shù)對漢族、維吾爾族人群MBL結(jié)構(gòu)基因第一外顯子GGC54GAC突變進行檢測，并估算其基因頻率，比較漢族、維吾爾族該位點突變的差異。 材料與方法： 1．收集漢族、維吾爾族普通人群血標本，提取白細胞基因組DNA， 并建立擴增目的基因片段的基本PCR反應體系。 2．建立聚合酶鏈反應－單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析＊ingle strand conforma－ tlonpolymorphlsm analysis ofpol仰erase chain reaction production， PCR－SSCP）方法，初步調(diào)查漢族人群MBL基因GGC54GAC突變情況。 3．建立分子燈塔（molecular beacon，MB）技術(shù)，檢測分析漢族。 維吾爾族人群MBL基因GGC54GAC突變基因。 結(jié)果： 1．用紅細胞裂解液和 PCR緩沖液／非離于去污劑／蛋白酶K兩種自配 試劑成功地提取了所收標本的人白細胞基因組DNA，并以此為模板成功 擴增出預期的 109hp MBL目的基因片段。 2．PCR－SSCP 方法初步篩查166 個漢族樣本，共檢出MBL GGC54GAC雜合突變19例，占11．45O，未檢出突變純合子。 3．成功建立了 MB雜交可視檢測技術(shù)，并在 13 8份漢族樣本中檢出 MBL GGC54GAC突變純合子 3例，占 2．17％，雜合子 29例，占 ZI刀1％； 120份維吾爾族標本中，檢出突變純合子1例，占0．83％，雜合子22例， 占 18．34％。 結(jié)論： 1．MB雜交技術(shù)特異性強，簡單快捷，能進行可視性檢測，完全適 用于點突變和 SNP的研究，技術(shù)特點明顯優(yōu)于PCR－SSCP。 2．漢族人群MBL結(jié)構(gòu)基因第一外顯子GGC54GAC 突變頻率為 0月3，維吾爾族的突變頻率為0．10，兩民族GGC54GAC基因型分布和突 變頻率無顯著差異。
【學位單位】：第一軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：R392
【部分圖文】：

以上述條件進行PCR擴增，證實該批模板可用于人MBL目的基因片段的擴增，但PCR擴增產(chǎn)量間有一定的差別(見圖2)。所有樣品DNA經(jīng)PCR擴增后，均可得到預期長度的目的基因片段，與克隆的標準模板所擴增產(chǎn)物的長度相當(見圖3)。

MBL目的基因擴增產(chǎn)物電泳圖
【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 陳政良;甘露聚糖結(jié)合蛋白[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);1997年01期

2 陳政良,朱錫華;天然免疫系統(tǒng)的“分子模式識別作用”及其免疫生物學意義[J];免疫學雜志;2000年03期

3 陳政良,朱錫華,謝佩蓉;中國人MBLc DNA的克隆與序列分析[J];免疫學雜志;1999年02期

4 王方勇,陳政良;甘露聚糖結(jié)合凝集素相關絲氨酸蛋白酶[J];生命的化學;2002年02期

5 陳政良,盧曉,張麗蕓,韓強濤;GGC54GAC MBL突變體的構(gòu)建[J];中國免疫學雜志;2001年05期

本文編號：2846223